浅谈成功制作小鼠骨髓细胞染色体标本方法.pdfVIP

维普资讯 2008年第4期(第14g-) 科学教弯ScienceEducation 。69· 浅谈成功制作小鼠骨髓细胞染色体标本方法 李 标 (重庆邮电大学生物信息学院 4o0065) 摘 要 本文探讨了秋水仙素浓度、处理时间、低渗液浓度、固定次数及染色液等对小鼠骨髓细胞染色体制片效果的 影响。根据直观分析得如了制作小鼠骨髓细胞染色体标本的最佳条件是：4．Og／L秋水m；素处理时闯3小时，O．ff75M 的KCI溶液低渗、两次固定、两次离心、改良石碳酸品红染液染色，可得蓟大量图像清晰、度适中、分散良好的中期细 胞分裂褶。 关键词 小鼠 骨髓细胞 染色体 实验方法 小鼠骨髓细胞染色体标本的制作是细胞遗传学课 插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从骨髓腔的另一端 程的基本实验之一，但由于材料处理、实验室实验条件 流 出。 和个入操作手法的差异，小鼠骨髓细胞染色体标本潮 低渗：震吸管褥滓洗液妖打凡次，然后把离心管放 作方法也不尽相 同。笔者在遗传学实验教学过程中， 在37℃的恒温永浴锅中低渗20分钟。 利用本实验室现有的条件，经过反复摸索 ，总结出了一 预固定：低渗结柬后将离心管取出加入 5ml新配 套适合本实验室的实验方法，现将具体方法及注意事 制的固定液，用吸管吹打均匀后放到37℃下固定 l0分 项介绍如下。 钟 。 1 材料与方法 离心：以1000r／rain离心lOmin。弃掉离心管中的 ． 秋水仙素处理：将4．Og／L的秋水仙素溶液0．1mL 上清渡。 注射人小鼠腹腔内，然后鲍l续喂养3小时左右。 再固定：加入新配制的固定液5mL，用吸管吹打均 收获骨髓细胞：断颈法迅速将其处死后将其股骨 匀后在37 下再圊定 i0mia。 取出并清理干净。用解剖剪将股骨头剪开，暴露出骨 离心：在 1000r／min条件下离心lOmin。 髓腔。将股骨的两端剪断，用一次性注射器 吸取在 制备细胞悬液：小心弃撺上清液 ，应避免将沉淀悬 37 深温的低渗液(0．075M 的KCI溶液)5mL，将针头 起。最后留大约2ml鲍上清滚，厢吸管吹打成细胞悬液。 生能超越模拟考的分数 。正确地评估 自己的水平 ，对高 比如说：我担心考试成绩差，其他 同学都 比自己 考充满信心，最后取得成功。2001年高考，上海文科状 强。 元王瀛几次模拟考下来，老师认为他想报北大只是一 ． 自我驳斥：①这种拯心有必要吗? 《毫无必要!)班 种幻想和奢望。可后来他不仅考上了北大，而且成为 里有比自己强的同学，但也有不如自己的。所以，自己 上海文科状元。他说 ：“我的性格就是两任何事物挑 的担心是元根据的。考试固然意味着阍他人的竞争 战，我冷静分析了自己的情况，把一些影响学习豹活动 但就个人的发展来说，归根到底是阍自已的竞争，通过 暂停，学习效率提高了 很多问题就迎刃而 。貔始终 考试检查，个人掌握知识的情况，以便改进。②这种担 榴信 自己，我就这样用信念稳定情绪，最终充分发挥了 忧有害吗?(有!)，这种担忧使 自己离开当前的中心任 自己的潜力。 务 ，把精力自自浪费在毫无价值的猜测上，影响了学习 许多的不幸都是从不榴信 自己开始的。考试焦虑 效率。③现在该怎么办?当务之急是努力做好该做 的 琏度的同学，脑子里总有很多担忧。比如说 ：“如果我 事 ，自然没了精力去耗人忧天。学习上要立足 自我潜 鸯不好，怎么对得起父母?”“我怎厶／面对老师、学，饱 能妁发挥，同时善于汲取其缒同学的成功经验。 们怎么