甘肃农业大学现代生物技术概论复习资料.doc

甘肃农业大学现代生物技术概论复习资料 1cDNA文库：即由mRNA录成cDNA,然后来构建文库，构建的文库不包含内含子。 基因组文库：把某种生物基因组的全部遗传信息通过载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。 区别：cDNA文库克隆的是不含内含子的功能基因而基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响 基因组文库编码的基因是真实的基因，包括内含子和外显子而cDNA文库克隆的是不含内含子的功能基因 2花药培养是用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术，接种在人工培养基上，以改变花药内花粉粒的发育程序，诱导其分化，并连续进行有丝分裂，形成细胞团，进而形成一团无分化的薄壁组织——愈伤组织，或分化成胚状体，随后使愈伤组织分化成完整的植株 花粉培养当花粉发育到一定阶段，从花药中分出单个花粉粒，为获得单倍体植株接种到特定培养基上，诱导其长出愈伤组织，再将愈伤组织移植到另一种特定的培养基上〔含不同配比的细胞分裂素和生长素〕，诱导分化出根和茎、叶，成为完整的植株 区别：从培养层次看，花药培养属于器官培养，花粉培养属于细胞培养，从培养过程看，花药培养相对较容易，技术较成熟 而花粉培养技术难度 较大 3.同裂酶来源不同，但具有相同序列的限制行内切酶 同尾酶来源各异，识别的靶序列也不相同，但产生相同的粘性末端。 区别，同裂酶切割位点不同，切出的粘性末端不同，不方便连接，具有相同的识别序列 同尾酶可以切出相同的粘性末端，方便进行连接识别序列不同 4.基因工程，是以分子遗传学为理论基础，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。 细胞工程是指按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术 区别：细胞工程是在细胞水平上的研究开发利用各种细胞的工程 基因工程是在分子水平上，现在体外进行切割，拼接，重组，获得重组DNA，之后再将重组DNA导入宿主细胞的或个体。这两种工程运用的酶也不同 5.DNA聚合酶, 以DNA为复制模板，从将DNA由5端点开始复制到3端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物等的情况下）及其相辅的活性。 反转录酶以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA的酶，即RNA指导下的DNA聚合酶 区别：DNA聚合酶是以DNA 为复制模板，依赖于DNA的DNA聚合酶，而反转录酶是以RNA为模板，依赖于RNA的DNA聚合酶 简述基因工程操作的基本路线。 要点：①分离能够编码所需产物的DNA片段 ②将目的基因克隆到适当的载体DAN中形成重组ＤＡＮ③利用细菌繁殖扩增重组ＤＡＮ④将目的基因导入到受体细胞中⑤筛选含有外源基因的转化细胞，并诱导产生转基因生物 2基因工程操作过程的主要步骤有哪些？ ①分离或合成基因；②通过体外重组将基因插入载体；③将重组DNA导入细胞；④扩增克隆的基因；⑤筛选重组体克隆；⑥对克隆的基因进行鉴定或测序；⑦控制外源基因的表达⑧得到基因产物或转基因动物、转基因植物 3分离目的基因的途径有哪些？ （1）酶切法（2）PCR法（3）化学合成法（4）基因组或cDNA文库法 4目的基因克隆的基本方法有哪些？ （1）直接从染色体DNA中分离：仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。 （2）人工合成（3）从mRNA合成cDNA （4）利用PCR合成：（5）从基因文库中筛选：首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆。 5、重组DNA 导入受体细胞方法 （1）化合物诱导法 （2）电穿孔法 （3）农杆菌介导基因转化法 （叶盘法）（4）微弹轰击法（5）超声波处理法 （6）脂质体介导法 （7）体内注射转化法 （8）精子介导法 6原生质体的制备工程。 ①取材与除菌，一般在活跃生长的器官和组织，除菌要因才而异。②酶解，用纤维素酶。③分离，采用低速离心法或比重漂浮法。④洗涤，以新的渗透压稳定剂或原生质培养液洗涤2-4次。⑤鉴定，将原生质体放入低渗透压溶液中，看其是否容易涨破。 7发酵下游加工的基本工作是什么？ ①发酵液预处理和固液分离。②提取，用吸附法，离子交换法，沉淀法，猝取法，超滤法。③精制，去除与产物物理化学性质比较接近的杂质。④成品加工，需要浓缩，无菌过滤等加工步骤。 8 PCR的基本原理。 先待扩增，DNA模板加热变性解链，②而后反应混合物冷却至某一温度，这一温度使两种引物分别与模板DNA的3一侧的互补序列杂交。③升温，耐热性DNA聚合酶催化引物按5→3方向延申合成模板DNA链的互补链。 9、 PCR的