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人工老化影响老芒麦种子醇溶蛋白遗传完整性的研究 1,2 2 2 2 2 周国栋 ,李志勇 ,李鸿雁 ,师文贵 ,刘磊 （1.中国农业科学院研究生院，北京100081；2.中国农业科学院草原研究所 农业部 沙尔沁牧草资源重点野外科学观测试验站，内蒙古呼和浩特 010010） 摘要：本研究利用酸性聚丙稀酰胺凝胶电泳技术A对老芒麦种子的6个老化处理水平共6份种子进行 醇溶蛋白遗传完整性的分析，结果表明：老芒麦种子在（58±l ）℃热水中老化6 min和9 min时，与对照相 比没有明显的变化；老化12 min以后，老芒麦种子醇溶蛋白图谱的条带在α、β区颜色开始变浅，甚至有的 条带消失。聚类分析结果表明：所有材料聚为两大类，第一大类包括（0min对照、老化6 min、9 min和12min） 共四个处理水平的材料；第二大类包括（老化15 min和18 min）共两个处理水平的材料。由此可见，低的 发芽率水平不利于老芒麦种质资源醇溶蛋白遗传完整性的保持。 关键词：人工老化，老芒麦，醇溶蛋白，遗传完整性 老芒麦(Elymus sibiricus L.) 别名西伯利亚披碱草，是禾本科(Gramineae) 小麦族(Triticeae)披碱草属 (Elymus)[1] 。老芒麦作为披碱草属的模式植物种，具有抗寒性强、耐旱和耐盐碱能力中等、粗蛋白含量高、 适口性好、易栽培等特点，不仅可用于建植人工草地和放牧草地，改良退化草地和种草养畜等[2-3]，而且在 [4] 研究披碱草属及其近缘种的系统发育上也有特殊的遗传地位 。 近几年来，醇溶蛋白电泳技术广泛应用于牧草种质遗传多样性研究、种质鉴定和种质遗传完整性的研 究。鄢家俊[5]利用醇溶蛋白技术对来自四川阿坝州、四川甘孜州、西藏、青海和甘肃五个地区的54份野生 老芒麦种质进行遗传多样性分析发现，野生老芒麦材料具有丰富的醇溶蛋白遗传多样性。马啸等[6]利用醇 溶蛋白标记技术对来自亚洲和北美的86份老芒麦材料进行研究，结果表明86份材料具有很高的醇溶蛋白多 态性，其多态性比率达到90.4 % 。同时在其他小麦族植物中检测到醇溶蛋白也具有很高的多态性，这一方 面说明在小麦族植物中含有丰富的醇溶蛋白，同时也说明利用醇溶蛋白技术做为检测小麦族植物的遗传多 样性是可行的[7-13] 。从以上各个研究来看，对小麦族植物，尤其是利用醇溶蛋白研究技术对老芒麦遗传多 样性的研究已经很成熟，但是，目前有关利用醇溶蛋白技术对老芒麦种质遗传完整性方面的研究还未见报 道。 本研究主要利用酸性聚丙稀酰胺凝胶电泳技术对6个老化处理水平的老芒麦种子进行醇溶蛋白遗传完 整性的分析，以期探讨野生老芒麦种子随着保存时间的延长，醇溶蛋白遗传完整性的变化，以便为老芒麦 种质资源的安全保存、其他禾本科牧草遗传完整性的检测和种子的繁殖更新标准提供科学的方法和依据。 1 材料和方法 1.1 材料 本试验材料由中国农业科学院草原研究所牧草中期库提供，该实验材料是2010 年8 月在田间收获， 经过凉晒清选，筛选出本实验的研究材料。为了保证实验数据的准确性和精确性，本实验材料的含水量为 7.175 ± 1.384 %，千粒重为0.407 ± 0.003 g 。 收稿日期： 基金项目：农业部农作物种质资源保护与利用项目；牧草种质资源保护项目；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项“牧 草种质资源收集、评价及创新研究”。 作者简介：周国栋(1983-)，男，甘肃白银人，在读硕士生，研究方向为牧草种质资源与育种。E-mail:popstudent138@126.com 通信作者：李志勇 E-mail:zhiyongli1216@126.com 1.2 材料的处理 为了得到一系列不同活力的老芒麦种子，本文将采用Bhattacharyya 等[14]介绍的（58±l ）℃热水老化法 (Hw)，对老芒麦种子进行老化处理。老化时间分别为0 （对照）、6、9、12、15、18 min，处理完毕后取 出种子在室温下晾3~4 d，使种子含水量降至原始状态后放在4 ℃保存并进行活力测定和醇溶蛋白电泳分 析。 1.3 种子活力的测定 参照牧草种子检验规程[15] 中的老芒麦的标准发芽条件对各处理材料进行发芽实验，每个处理3 次重