动物饲料和胃肠道微生物区系%3a胃肠道微生物区系的营养生态学.pdfVIP

11卷 增刊 动物营养学报 V01．11．Supple．，33～36 1999 SINICA Dec 1999年12月 ACTAZOONUTRIMENTA 动物饲料与胃肠道微生物区系： 胃肠道微生物区系的营养生态学 DL Williams 朱伟云1，姚文1，B 2，A Akkermans3， STamminga2，韩正康1 (1．南京农业大学动物科技学院．江苏南京210095：2．荷兰瓦赫宁根农业大学动物科学系 3．荷兰瓦赫宁根大学微生物系) 摘要： 本文主要就我们近年来应用PCR为主的核糖体RNA基因方法对不同生态 环境下微生物多样性的新研究及新菌种的鉴定以及这些微生物体外发酵特性等方面 研究结果及进展情况作了介绍．同时对关于胃肠道真菌的研究也作了概述。 关键调：PCR；棱糖体RNA；微生物；真菌 935 文献标识码：A 中圈分类号：S816；Q 很多动物的消化系统为各种微生物提供适宜的生活环境。反过来，胃肠道微生物对宿主 动物有两方面的作用：一是它们帮助消化食物，为动物提供各种营养物质；二是它们起着益生 素作用，调控胃肠道微生物区系本身之间的平衡，保证动物的健康。对于前者。虽然已有很多 研究，但是人们并不完全清楚这些微生物的作用机理。对于后者的研究较少，但是人们已开始 认识到益生索的重要性，并在饲料中添加外源益生素。有报道认为．某些外源的非降解寡糖通 过调控肠道微生物区系的平衡对动物起保健作用。目前，我们对外源益生素的作用机理并不 十分清楚，对动物本身体内的微生物的调控作用更不了解。这其中一个重要的原因是我们缺 乏对这类微生物的充分认识。 动物胃肠道微生物区系是非常复杂和多样化的。目前常用的传统的培养方法只能培养很 少数的微生物，由此迄今只有很少数的微生物得到描述。但并不能代表胃肠道中整个微生物 区系的活性。近年发展起来的以PCR为主的核糖体RNA基因方法，已被成功地用于不同生 态环境下的微生物多样性的研究及新菌种的鉴定。我们采用这种技术，研究不同日粮和应激 条件下，动物胃肠道微生物种类的变化。另一方面。根据这些微生物体外发酵特性，研究胃肠 道微生物整体发酵活性的变化。下面就这两方面．介绍我们的研究结果及进展，同时介绍关于 胃肠道厌氧真菌的研究。 1用分子技术研究动物胃肠道微生物区系 近年来．以核糖体RNA为主的分子技术发展迅速。核糖体RNA基因的保守区域可以用 作合成DNA的引物。对RNA基因的变化区域进行PCR扩增反应。根据核糖体RNA基因序 列的变化区分不同的微生物。最新的技术，如变性梯度凝胶电泳和温度梯度凝胶电泳法，具有 基因序列专一性，可以直接用以检测微生物区系的组成。由PCR扩增后得到的长度相同、而碱 动物营养学报 第u卷 基对组成不一的DNA片段，经这两种梯度凝胶电泳后得到分离。我们从猪粪便中提取总 段。然后。经变性梯度凝胶电泳，分析不同处理的PCR扩增片段，比较细菌种类变化。另一方 面。我们对代表性样品DNA进行克隆及基因序列分析，以揭示￡要细菌的种类。通过这种基 因分析及下面将讨论的体外发酵活性的测定，我们希望找出微生物区系的组成和这些微生物 体外发酵活性之问的关系，探讨饲料成分和环境应激对这种关系的影响。此项研究正在进行中。 对胃肠道厌氧真菌，我们采用了18S核糖体RNA的基因序列分析法对菌株进行鉴定。我 fflX,t来自不同国家、地区，不同动物的厌氧真菌菌株进行DNA提取，对这些真菌的】8s核糖 体RNA基因簇的内转子一区及其相邻的基因序列，经PCR扩噌后进行分析，确定新菌株与 已知菌株的进化关系，从而确定它们的分类地位。另外，我