BG2基因转化美洲黑杨-泰山1号的初步的研究.pdfVIP

BG2基因转化美洲黑杨一泰山1号的初步研究 罗磊1，王迎卜，黄艳艳1，王斌2，刘静1 (1泰安市泰山林业伴麴哥院院271000：2中国科学院逮传与发育生，防豁巩究所100101) 摘要：利用农杆菌介导法将13 1,3．葡聚糖酶基因(BG2)转入美洲黑杨一泰山l号。 本研究以叶片为外植体，建立了泰山l号的高效再生体系，并进一步以茎段、叶 柄、叶片为受体材料，利用农杆菌介导转化BG2基因。通过抗生素筛选获得大量 抗性植株。经对抗性植株的PCR鉴定，获得6个株系的转化植株。 关键词：美洲黑杨，根瘤农杆菌，BG2基因，基因转化 deltoidesBart 美洲黑杨(Populus r．)原产于北美，是北美重要的森林树种， 也是美洲和欧洲的造林树种。美洲黑杨一泰山1号是近年来山东泰安格林公司选 育出的生长速度快、材质好、抗逆性强和生态适应范围广的优良杨树品种，非常 适合营建胶合板林和纸浆林。近年来，杨树病虫害的发生越来越严重，到目前为止， 我国有记载的杨树害虫有320余种，主要病虫害约50余种。同时由于农药的滥用， 致使害虫的抗药性增强，从而导致杨树病虫害的发生更加严重。因此，单纯依靠 常规育种手段很难从根本上解决问题，基因工程在农林业上的应用为解决这一问 题开辟了一条新的途径。 B related 1,3．葡聚糖酶是一种PR蛋白(pathogensisproteins，PR)，是植物受 到病原菌侵染后，细胞发生程序性死亡的同时，自身释放出胞液中储存的有害物 质中的一种。B．1，3．葡聚糖糖在植物中的含量非常低，但在真菌细胞壁中却普遍 存在，如半子囊菌纲、卵菌纲、壶菌纲等真菌中均有B．1,3．葡聚糖覆盖在胞壁最 外层。而B-1,3．葡聚糖酶则能以13．1,3．葡聚糖为底物，将其水解为葡萄糖等小分 子化合物。故该酶可破坏真菌的细胞壁致使细胞内含物外溢，从而导致植物病原 真菌死亡。同时，体外抑菌实验证明：该酶具有抗菌功效，能够抑制真菌菌丝的 生长。基于以上事实，本研究构建了曰G2的高效表达载体，并利用农杆菌介导 法将其导入泰山一号，得到了抗Kan的再生植株，并进行了分子生物学检测， 以期为培育抗病杨树材料打下基础。 l材料与方法 1．1植物材料，菌种和质粒 研究所用材料一泰山l号为近年来山东泰安格林公司选育出优良杨树品种。 13—1,3-葡聚糖酶基因载体为pATC940质粒，由中国科学院遗传与发育生物学研究 所王斌研究员提供，已被转移到农杆菌LBA4404菌株中。载体构建图谱如图l。 5’跏1 ‰l ‰I ’^协I pATCBG2 图l 植物袁达载体pATCBG2的构建 of Construction 魄．1 plantexpression vectmof pATC凇 1．2方法步骤 1．2．1黑杨试管苗培养 以MS为基本培养基，附加蔗糖及激素，将无菌苗接种于不同激素配比的培 4-5周后观察试管茁生长情况，筛选较佳培养基配方。 表1 正交试验设计L‘(22) Table1 The orthogonalL4(21) design l 1．5