腈水解酶psn基因工程菌de发酵及产酶条件优化.pdfVIP

第 12卷第 5期 生 物 加 工 过 程 V01．12No．5 2014年 9月 ChineseJournalofBioprocessEngineering Sep．2014 doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2014．05．002 腈水解酶psn基 因工程菌的发酵及产酶条件优化 熊 雷，李 恒 ，龚劲松 ，杨 涛，朱小燕，许正宏，史劲松 (江南大学 药学院，无锡 214122) 摘 要：来 自恶臭假单胞菌的腈水解酶具有高效催化3一氰基吡啶产烟酸的能力，对表达该酶的基 因psn进行发酵 和产酶条件优化，通过对 c源、N源、磷酸盐、金属离子、温度、诱导剂浓度和诱导时间进行单因素考察 ，获得最适培 养基条件 ( L)：葡萄糖5、蛋白胨 15、酵母粉 5、(NH4)2SO45、K2HPO424．5、KH2P045．76、MgSO40．48；最佳诱导 务件：培养2．5h后添加IPTG诱导，浓度O．2mmol／L，诱导温度30℃。在该条件下培养，重组大肠杆菌的腈水解酶 比酶活可达到45．67U／mL，比优化前提高了2．26倍。在此基础上，于5L发酵罐上进行 c、N源的补料研 究，获得 最适分批补料策略，发现其腈水解酶活力可达到 75．40U／mL，是优化前的3．74倍。 关键词：腈水解酶；烟酸；发酵；分批补料培养 中图分类号：Q78 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672—3678(2014)05—0007—07 Optim ization offermentationandnitrilaseproduction conditionsof engineeredEscherichiacoliforexpressionofpsn gene XIONGLei，LIHeng，GONGJinsong，YANGTao，ZHUXiaoyan，XU Zhenghong，SHIJinsong (SchoolofPharmaceuticalScience，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China) Abstract：Nitrilasefrom Pseudomonasputidaexhibitedhighspecificitytoward3一cyanopyridineandcould beusedforgeneratingnicotinicacid．In ordertooptimize thefermentation conditionsofrecombination Escherichiacoliforexpressionofpsngene，theinfluencesofcarbonsource，nitrogensource，phosphorus， metalions，temperature，IPTG concentration，timeforinductionofrecombinantE．coliofrexpressionofpsn wereoptimizedbysinglefactortest．Theoptimum cultureconditionsofrtheproductionofnitrilaseareas follows：glucose5g／L，tryptone15g／L，yeastextract5g／L，(NH4)2SO45g／L，K2HPO424．5g／L， KH2PO45．76 g／L，MgSO40．48 L．Theoptimaltimepoint，concentration，temperatureofrinduction withIPTGwereat2．5hafterinoculation，0．2mmo]．／Land30℃ ，respectively．Theactivityofnitfilase expressedinE．coliundertheoptimalfermentation conditionsreachedup t