黑木耳种内分子遗传变异的研究.pdfVIP

第30卷增刊 山东农业大学学报 1999年5月 Vot．30 Journal—ShandongAgriculturalUniversity May1999 黑木耳种内分子遗传变异研究 闰培生 崔文善张金政 (莱阳在学院植保系应用真菌研究奎．山东弟研j265200) 罗信昌 周启 (华中农业太学农业部农业澈生物重点实验事．武汉430070) 【摘要】本文利用PCR技术，研究r黑木耳种内不同菌株的ITs—RFI．P和RAPD．结果 表明，供试1l十菌株的棱rDNA的ITS区域不存在酶切片段长度多态性，显示种内的遗传 稳定性t丽RAPD结果表明．基因组DNA的其它区域存在丰富的变异．儿个菌株的平均遗 传相似系数仅为0．48(变化范围为0．22至0．7Z)．UPGMA聚类分析表明．在0．50相似水平 下．可将供试的11个菌株分成四大娄。本研究结果表明．ITS—RFl．P可用于黑术耳种级的鉴 定．RAPD可用于种内不同菌株的鉴定和种质资源的遗传变异分析与评估。 j皇键词：燕木耳{ITS--RFLP{RAPD 我国是黑术耳栽培的发祥地和主产国，是我国传统的出口商品之一，在我国，其自然 分布很广，北自黑龙江、吉林，南至广西、贵州，西起陕西、甘肃．东至福建、台湾，遍及垒国 20多个省、市、自治区…。为了对黑木耳种质资源进行有效地鉴定和评估，我们利用PCR 技术，首次对我国不弼产区的黑木耳菌株从DNA分子水平上进行遗传变异分析，以期为 进一步深入研究提供科学依据。 1材料和方法 1．1供试菌株 西)。 1．2 DNA提取与PCR反应 组DNA的随机扩增采用lo个碱基的随机引物；限制性内切酶酶切反应按厂家提供的条 件进行(Promega)。 1．3数据处理 用NTSYS--PC软件进行菌株间相似系数计算，UPGMA软件进行聚类分析。 增刊 闰培生等：黑木耳种内分子遗传变异研究 ·103· 2结果与分析 2．1 ITS--RFLP 一NDA片段，而在阴性对照中，未扩增出任何片段；利用4种限制性内切酶(HinfI、Taq 供试所有黑木耳菌株中完全一致，这说明黑木耳种rDNA的ITS区域较为保守，其中， 和209bp)DNA片段，具有黑木耳种的特异性和稳定性．尽管供试黑术耳菌株在子实体颜 利用lTs—RFLP对黑木耳种进行快速准确地鉴定。 2．2 RAPD结粜 不同引物对11个菌株的基因组DNA进行随机扩增结果表明，扩增图谱既表现出种 内的稳定性．又反映出不同菌株之间的差异，如引物s4在黑木耳种不同菌株闻，只能扩增 (2．54kb)，该带仅能从黑术耳秭li同菌株中扩增出，而不能从其它术耳属种中扩增出”’， 表现出黑木耳种的稳定性．而引物sl扩增图谱显示，不同菌株扩增的DNA带数在6～12 条之间，大小为0．4z～2．65kb，DNA指纹图谱在不同菌株间差异明显，可将不同菌株明 确区分开。 2．3遗传相似性与聚类分析 性DNA带进行遗传相似性分析表明，两两菌株间的遗传相似系数从最低的0．22(An与 相似系数最低的种类，这表明我国黑木耳种质资源非常丰富；对11个菌株的聚类分析表 株，第四类包括A04和A09两个菌株，聚类结果显示，同一类中包含有不同地理来源的菌 株，而相对同一地理来源的菌株又皱明显地聚在不同类群中，这说明黑木耳菌株间的遗传 差异在一定程度上与其地理来源并不完全相吻合，这可能与引种、肯种等实践措旅有关， 另一方面也反映了以形态特征、地理起源等方面为依据对菌株进行遗传差异评估时，由于 这些指标不一定与基因型相吻合，因而．其结果并不一定准确可靠。1，只有从DNA分子 水平上揭示的菌株问遗传变异，才能为台理利用种质资源提供科学依据。 参考文献 1 榜新美主编食用菌栽培学．北京；中崮农业出版社．1996，167～180 2闰培生．中国木耳属菌株的分子鉴定及丹}系统发岢关系研究(博士学位沦文)．武汉：华中农业大学生辩 院．1998 ．104． 山东农业大学学撤