苍白二陈汤对代谢综合征大鼠主动脉ICAM1+表达的影响1.pdfVIP

atherosclerosis 代谢综合征（Metabolic syndrome ，MS ）是以中心型肥胖、高血压、血脂紊乱、糖 尿病或者糖耐量异常以及胰岛素抵抗为主要临床表现的一组证候群，与心脑血管病密切 [1] 相关，患者心血管病风险增高2 倍 。动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS ）是一个可预 测心血管病变事件发生的全身性病变，降低MS 患者动脉粥样硬化风险对于预防心血管 事件的发生具有非常重要的意义。细胞间粘附分子-1 （intercellular adhesion molecule 1， ICAM1 ）在血管壁上的表达是引起一定部位组织损伤和炎症反应的关键，与动脉粥样硬 化的发生、发展关系密切[2] ；MS 发生时，ICAM-1 的异常表达可由氧化型低密度脂蛋白 （oxidized-low density lipoprotein ，ox-LDL ）和肿瘤坏死因子-α （tumor necrosis [3,4] factor-alpha，TNF-α）所介导 。本项研究采用高糖高脂高盐饲料喂饲的方法建立大鼠 MS 模型，观察健脾燥湿经典方苍白二陈汤抗MS 模型大鼠动脉粥样硬化作用，并从对 主动脉ICAM-1 表达的影响入手初步探讨其作用机制。 1 材料 1.1动物及饲料 选用山东中医药大学实验动物中心提供的离乳健康雄性SD大鼠50只， 体重50～60g，普通清洁级，动物合格证号：SCXK （鲁。基础饲料为山东中 医药大学实验动物中心提供普通清洁级动物饲料，高糖高脂高盐饲料参照文献改进，配 方为：普通饲料53%，猪油10%，白糖10%，奶粉10%，蛋黄12%，豆粉2% ，盐3% 。 1.3 试剂及仪器 苍白二陈汤由苍术、白术、陈皮、茯苓、半夏、甘草组成，购自山东 中医药大学中鲁医院；洛伐他汀片（山东鲁抗医药股份有限公司）；血糖、血脂检测试 剂盒（奥林巴斯诊断产品有限公司）；ox-LDL ELISA测定试剂盒（上海荣盛生物技术有 限公司）；TNF-α放免检测试剂盒（美国Endogen公司）；抗ICAM1抗体（ab2213 ）。Olypus Au2700全自动生化分析仪（日本东芝公司）；EL340I酶标仪（美国Biotok公司）； SN-6105 放射免疫计数仪（上海日环仪器厂）。 2.实验方法 2.1 代谢综合征动物模型建立 选用离乳健康SD雄性大鼠50只，体重50～60g，随机分 为2组：对照组10只给基础饲料，造模组40只给予改进的高糖高脂高盐饲料喂养。20周 后，测量体重、收缩压、空腹血糖、TG和HDLc等指标。参照2005年国际糖尿病联盟（IDF ） 颁布的代谢综合征诊断标准，即存在中心性肥胖，伴有高甘油三酯血症、低高密度脂蛋 白胆固醇（HDLc ）、高血糖和高血压等其中两项者，判定为MS模型大鼠，共得到21只。 2.2 分组和给药 将21只MS大鼠随机分为3组：模型组、西药组（洛伐他汀片， 2mg/kg·d-1 ）、中药组（苍白二陈汤，6.6g/kg·d-1 ），每日一次，连续灌胃4周，模型组每 日灌服等容量蒸馏水。 2.3 血液指标检测 禁食禁水12小时，腹腔静脉取血分离血清，以Au2700 全自动生化 分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLc)，低密度脂蛋白 胆固醇(LDLc) ；酶标法检测血清ox-LDL ；放射免疫分析法检测血清TNF-α。计算动脉粥 样硬化指数（atherosclerosis index，AI ）：AI= [TC-HDLc ）] ／HDLc 。 2.4免疫组织化学染色法检测主动脉ICAM-1 的表达：实验动物开胸切取部分胸主动脉， 置于10％中性福尔马林液中固定，48 h 内常规石蜡包埋。组织切片常规进行脱蜡及抗原 修复后，按试剂盒说明书逐步进行免疫组化染色，用SABC法。ICAM1 阳性表达定位于 细胞浆和细胞膜，主要位于血管内皮细胞，血管平滑肌细胞亦有阳性表达。采用 DEIAS-2000丹尼尔医学图像分析系统进行图像分析，在200倍光镜下，每张切片随机取3 个视野，测定阳性物质平均光密度(mean density)值。 2.6 统计学方法 各组数据用均数±标准差（x ±s ）表示，各组间比较用one-way ANOVA ，用SPSS14.0软件进行统计分析