小鼠胚胎干细胞体外定向分化为血管平滑肌细胞实验与研究.pdfVIP

第三届全国下肢血管疾病学术论坛 暨第四届全国血管外科与组织工程学术研讨会汇编 小鼠胚胎干细胞体外定向分化为血管 平滑肌细胞的实验研究 熊吉信1刘兆轩2刘小春2杨春江1 【摘要】目的探讨体外定向诱导小鼠胚胎干细胞向血管平滑肌细胞分化的条件，为血管组 织工程提供种子细胞。方法用条件培养基体外培养小鼠胚胎干细胞增殖，构建拟胚体分化模 同时间段加入，进行诱导分化，同时设不加诱导剂的自发分化对照组。应用逆转录一聚合酶链反 因的表达，应用免疫组织化学和免疫荧光检测SMA的表达，验证细胞的性质。结果胚胎干 细胞在体外能自发形成拟胚体，经过分阶段联合诱导，拟胚体贴壁后球体略摊开，10d拟胚体 的周围出现圆形细胞，14d拟胚体周围出现大量梭形细胞生长，21d细胞经过RT—PCR检测的 SMA为强阳性，28d细胞的总RNA含量降低；14d将拟胚体消化，细胞生长良好。可见血管 平滑肌样细胞，经过免疫细胞化学和免疫荧光检测SMA表达为阳性。结论胚胎干细胞在特 定的条件下可以分化为血管平滑肌细胞，分阶段联合诱导血管平滑肌细胞的纯度有所提高，随 着这个问题的进一步解决，胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞。 【关键词】 胚胎干细胞血管平滑肌细胞血小板源性生长因子BB INDUCEDDIFFERENTIATl0N0FMOUSEEMBRYONICSTEMCELLINTOVASCU— MUSCLECELLIN LARSMOOTH VITR0 XIONG Zhaoxuan，LIUXiaochun，et ofVascular Jixin，LIU a1．Department Surgery， SecondAffiliated of HospitalNanchangUniversity，NanchangJiangxi，330006，P．R．China author：XIONGJixin，E—mail：liuzhaoxuanl981@163．com Corresponding To an conditiontoinducemouse stemcells [Abstract]Objectiveexploreoptional embryonic intovascularsmoothmuscle cellsforvascular todifferentiate cells，and seed tissue provide engi- EScellswereculturedwiththeconditionculturemedium，anddrewupthe neering．Methods differentiation and model．10—9mol／Lall—trans—retinoic embryoidbody acid、3ng／mlTGF-131 factor—BBwereusedinthis growth 20ng／mlplatelet—derived andimmunofluorescencewereusedtodetect，to the and tochemistry analyzemorphologytype 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者单位：1南昌大学第二附属医院血管外科(南昌，330