靶向多肽探针设计、筛选与肝癌活细胞成像分析.pdfVIP

第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会  靶向多肽探针的设计、筛选与肝癌活细胞成像分析 黄嫣嫣、赵睿* 中国科学院化学研究所，中科院活体分析化学重点实验室，北京，100190 zhaorui@iccas.ac.cn 恶性肿瘤在全世界范围的发病率持续上升，严重威胁着人类的健康与生命。由于其发病 机制尚未完全阐明，长期存在着早期诊断难、源头创新药物少和治疗手段缺乏等问题。因此， 针对由癌细胞产生的、与肿瘤特性密切相关的生物标志物，发展高亲和力、高特异性靶向生 物探针，可为恶性肿瘤的早期发现、转移预警和治疗提供新的思路和手段。 多肽作为重要的内源性生理活性物质，具有高度多样性，参与并调控着生物体内许多重 要的生理、生化功能。相比于抗体等大分子探针，小分子多肽探针具有免疫原性低、穿透性 强、性质稳定、可控、作用快、易于实时监测的优点，可以在分子水平研究细胞及其内部生 化反应等生理过程。溶酶体四次穿膜蛋白（LAPTM4B ）与肿瘤细胞的存活、增殖、信号转 导密切相关，在肿瘤的发生、生长及转移过程中具有显著的促进作用。其表达上调的幅度与 病理恶性度呈正相关，而与肿瘤患者的生存期呈负相关。 本研究选择肿瘤标志蛋白 LAPTM4B 为靶蛋白，以其第二胞外区 EL2 片段为靶点，依 据正义肽-反义肽相互作用以及反义肽的简并性，设计并合成了反义肽库，构建了基于亲和 色谱的高效亲和筛选体系，发展了基于反义肽简并性的功能导向筛选新方法，通过扩展合成、 扫描筛选，获得了高亲和力、高选择性的靶向多肽 AP2H 。在生理条件下，AP2H 与 EL2 的 -6 平衡解离常数为 5.5110 mol/L 。进而以特异性识别肿瘤标志蛋白LAPTM4B 的多肽AP2H 和具有聚集诱导荧光增强效应的四苯乙烯为基元，构建了信号可控的多肽荧光探针（TPE- AP2H ）。在识别多肽 AP2H 的导向下，TPE-AP2H 探针可特异性与肿瘤细胞表面的 LAPTM4B 蛋白结合，并激活 TPE 荧光团的信号，实现了目标分子的高信噪比检测。多肽探针定位于 细胞膜以及细胞质，不存在于细胞核，与 LAPTM4B 蛋白在细胞中的分布情况一致。AP2H 实现了对 LAPTM4B 蛋白高表达的人肝癌 HepG2-mock 细胞和低表达的 HepG2-RNAi 细胞 的准确辨别。此外，多肽序列中的多重组氨酸赋予了探针在弱酸性条件下更强的亲和力与更 显著的荧光信号增强效应，表明 TPE-AP2H 不仅可识别肿瘤细胞的生物标志物，而且能对 肿瘤细胞特有的酸性微环境产生响应，可望在肿瘤发生、发展相关的关键分子事件的示踪监 测中发挥重要作用。 参考文献： [1] A. L. Boyle, D. N. Woolfson, Chem. Soc. Rev., 2011, 40, 4295-4306. [2] J. R. Heal, G. W. Robert, J. G. Raynes, A. Bhakoo, A. D. Miller, ChemBioChem, 2002, 3, 136-151. [3] Y. Y. Huang, R. Zhao, Y. B. Fu, Q. D. Zhang, S. X. Xiong, L. Li, R. L. Zhou, G. Q. Liu, Y. Chen, ChemBioChem, 2011, 12, 1209-1215. [4] Y. Y. Huang, F. Hu, R. Zhao, G. X. Zhang, H. Yang, D. Q. Zhang, Chem. Eur. J., 2014, 20, 158-164. [5] 感谢国家自然科学基金委和中科院化学所的资助。 43