融合蛋白 GSHbFGF 的构建、表达及体外活性检测.pdfVIP

第３６卷第２期 暨南大学学报（自然科学与医学版） Ｖｏｌ．３６　Ｎｏ．２ ２０１５ 年４月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＪｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ａｐｒ．　２０１５ 　 融合蛋白ＧＳＨｂＦＧＦ 的构建、表达及体外活性检测 陈　霖，　周天鸿，　邹　奕 （暨南大学生命科学技术学院生物工程系，广东广州５１０６３２） ［摘　要］　目的：设计构建和表达新型融合蛋白谷胱甘肽 －碱性成纤维细胞生长因子（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＧＳＨｂＦＧＦ），并检测其体外抗氧化、抗衰老能力．方法：采用ＲＴＰＣＲ，酶切，连接，转化等分子克隆技术 构建新型融合蛋白ＧＳＨｂＦＧＦ，并通过镍柱亲和层析、阳离子交换层析纯化该目的蛋白．通过 ＣＣＫ８ 试剂盒检测 ＧＳＨｂＦＧＦ对鼠源成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３ 的促增殖活性．同时，经总抗氧化检测试剂盒检测ＧＳＨｂＦＧＦ 的抗氧化能 力．结果：克隆表达并纯化获得融合蛋白ＧＳＨｂＦＧＦ．ＣＣＫ８促增殖结果显示质量浓度为２０ ｎｇ／ｍＬ 的ＧＳＨｂＦＧＦ可 显著促进鼠源成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３增殖．体外抗氧化结果显示ＧＳＨｂＦＧＦ有显著的抗氧化活性，纯化得到的ＧＳＨ ｂＦＧＦ蛋白的ＧＳＨ浓度约为（００６ ±００２） ｍｏｌ／Ｌ，抗氧化能力为（０５６ ±０２３）ｍｍｏｌ／ｇ．结论：新型融合蛋白 ＧＳＨ μ ｂＦＧＦ 有显著的体外促增殖能力及抗氧化活性． ［关键词］　谷胱甘肽－碱性成纤维生长因子；　促增殖能力；　抗氧化活性 ［中图分类号］　Ｑ５９９　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１０００－９９６５（２０１５）０２－０１０８－０６ ｄｏｉ：１０．１１７７８／ｊ．ｊｄｘｂ．２０１５．０２．００３ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆａ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ＧＳＨｂＦＧＦ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆｉｔｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＣＨＥＮ Ｌｉｎ，　ＺＨＯＵ Ｔｉａｎｈｏｎｇ，　ＺＯＵ Ｙｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＢｉｏｃｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ａｉｍ：Ａ ｎｏｖｅｌ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ＧＳＨｂＦＧＦ）ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ＢＬ２１．Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｎｆｌｕ ｅｎｃｅ ｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ＯＲＦｏｆＧＳＨａｎｄｂＦＧＦｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙ ＲＴＰＣＲａｎｄ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＥＴ２１ｂ．Ｔｈｅｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ＧＳＨｂＦＧＦｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ＢＬ２１ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＮｉＮＴＡ、ｃａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ （ＮＩＨ３Ｔ３）ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂ ｓｅｒｖｅｄ ｕｓｉｎｇ ＣＣＫ