神经细胞培养方法概述.pdfVIP

科技创新与绿色植保 神经细胞培养方法概述+ 薛 丽 水克娟 吕朝军 胡美英 钟国华” (华南农业大学昆虫毒理研究室，广州510642) 摘要：神经细胞体外培养技术在当前神经科学研究中占据前沿地位，目前已经渗透到 多个学科，并与许多先进技术结合在一起。同时神经细胞因对培养条件要求高、培养难度大 等特点而影响着它的普及和发展。本文系统地综述了近年来神经细胞培养的一些观点、方法 及要注意的一些问题，提出加速昆虫神经细胞培养研究，为建立新型害虫控制靶标导向的新 农药研究开发体系提供基础。 关键词：神经细胞；培养 1前言 神经科学是现代科学中进展最为迅猛的研究领域之一，它成为生命科学的发展前沿已 是众多科学家的共识，而神经细胞培养是进行神经科学研究的重要实验手段，细胞培养的 质量将直接影响着研究工作的进展。神经系统主要有神经元和神经胶质细胞组成。这两种 细胞与其他体细胞有着明显不同的生物学特性与形态特征，故培养方法也有所不同。神经 细胞的离体培养是指，在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下， 使细胞生存和生长并维持其形态和功能的方法。神经细胞培养技术在20世纪70年代开始 推广应用，在当前神经科学研究中占据前沿地位，并且渗透多个学科，与许多先进技术结 合在一起，但神经细胞又因其对培养条件要求高，培养难度大而制约着它的发展。 2神经细胞培养的历史 神经组织的体外培养方法是Harrison(1907)年首创的【1J，当时Harrison在蛙的凝固 淋巴块上进行蛙的胚神经组织的悬滴培养，发现了神经纤维的生长，从而支持了神经元学 离技术，将组织块分散为单细胞悬液，然后进行种植培养。在此基础上，人们又进行了纯 颔下腺中分离提纯出神经生长因子(NGF)，发现它能明显促进培养的背根神经节和交感 神经节细胞的生长，并因此而获得了1986年诺贝尔医学奖旧J。我国对神经细胞的研究较 晚，鲍漩、郭蜿华等在20世纪60年代进行了一些神经组织体外培养的研究。近年来我国 神经细胞培养研究工作发展得很快，神经细胞培养已逐渐与各种高新技术结合，如电生 理、神经调控、神经再生、神经移植、免疫、药理等。 ·基金项目：国家自然科学基金资助项目(No和全国优秀博士学位论文作者专项基金资助项目 (No．200461) 研究论文 257 3神经细胞培养的类型 3．1 神经细胞的原代培养 原代培养是指从活体获得细胞、组织或器官在体外条件下进行的第一次培养。采用胚 胎组织分离成单细胞悬液，并进行原代培养时，细胞将发生一系列特征性的变化。将培养 条件下分裂、增殖的细胞再进行传代培养，使其重新进人分裂增殖期，使细胞的特征常随 着培养传代次数的增加而逐渐改变，能快速分裂增殖的细胞群体所占的比例不断增大。 神经元的情形则显然不同，当从胚胎脑组织巾分离培养神经元时，由于他们已在原位 组织完成分裂时分化，所以培养的神经元将不再会分裂、增殖，却很快长出其特征性的突 起。相互之问形成突出联系，并具有生物电活性等。这使神经元培养与其他种类体细胞培 养相比有很大的不同。神经胶质细胞能够分裂、增殖，可以进行传代培养，至少可以传数 代，甚至还能分化并合成胶质。神经元则不能，要进行的二次试验，应重新获得组织进行 稀薄的分离和培养。 3．2神经细胞系培养 大多数细胞经重复传代一定次数后(一般为20～80代)将停止分裂，开始衰老。然 而也有某些细胞群可以无限传代，并表现出相当稳定的表现，成为连续细胞系。大多数细 胞系足来自肿瘤细胞，这些细胞通常具有一些特性，如分裂增殖的速度更快，能非锚定生 长而且将其重新植入到动物体内可形成肿瘤。 4神经细胞的培养方法 4．1分离细胞的培养 一般原代细胞培养是采用分离的细胞培养。首先将神经组织分离制成单细胞悬液，然 后接种于合适的底物上，数小时后神经细胞开始长出突起，这些突起最终将形成密集的神 经纤维网络。在适宜的条件下，这种培养物可维持数月。在此期间，培养的细胞将获得成 熟神经细胞的很多特征：具有明显的轴突和树突，相互问形成突触，有电活性。 分离细胞培养最明显优点是可获得单个分散的活细胞。在培养最初几天尚未形成复杂 的