间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒与抗原定位方法的初步建立.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次学术研讨会论文集(下册)(2008年河南新乡) 期和晚期均有表达：ZheZhao通过瞬时表达分析显示RGVdUTPase在感染后4h可被检测到，并在病 毒繁殖过程持续表达直至U48h。本试验的研究结果与以上学者研究结果基本一致。 3．4DPV 、 dUTPase宿主Ⅱ细胞定位与病毒增殖相关性的初步探讨 DAPI是一种可以穿透细胞暌与双链DNA结合，在紫外光激发光下产生蓝色荧光的核酸染料，常 12h后除了细胞核浓染深蓝色外，在细胞质中首次发现特异性的淡蓝色点状染色，24h染色加深。根 据DPV在DEF上的增殖及形态发生规律，本研究认为12h出现在细胞质中的特异性淡蓝色点状染色可 能为子代DPV病毒的核酸DNA染色，然后成熟病毒粒子不断增多，并通过核膜～内质网膜系统由胞 核转运至胞质，点状蓝色也相应加深。此现象与郭宇飞等在DEF感染DPV12h首次在细胞质和细胞核 观察到子代病毒：随后成熟病毒出现于胞质的结果相互应证。本研究认为DEF感染DPV后的12h是 关键的时间点，从细胞荧光量峰值的出现推断病毒dUTPase的表达此时也达到一个相对高的水平，也 正是病毒核酸大量增殖时期。由此笔者推测，病毒dUTPaSe在某种程度上与病毒的有效复制密切相关， 其高效表达保证了病毒基因组复制的保真度和病毒增殖的正常有效进行，需要进一步的实验验证。 另外，笔者认为DEF感染DPV12h细胞核形态与正常细胞相比，核缩小、变形：48h细胞轮廓模糊， 细胞核形态不规则，出现核分裂现象等与病毒在宿主细胞增殖所导致的细胞病变有关。 参考文献(25篇，作者略) 间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立 张舍郁1，程安春27-·弘，汪铭书1‘2‘，沈婵娟1，李传峰1 (1．四川农业大学动物医学学院禽病防治研究中心，四川雅安625014；2．动物疫病与人类健康四川省 的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。用差速 柱层析纯化出兔抗DSHDV 马血清37℃下封闭30min，然后加入1：50的一抗4℃孵育过夜，最后加入I：100FITC标记的含O．0l％ 禽流感病毒m5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性。IFA检测28 目龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官，心，肝、脾、胰，肺、肾、法氏囊、食管、气管、 胸肌、胸腺，十二指肠、空肠、回肠，盲肠和直肠为阳性；哈德氏腺、脑，皮肤、腺胃为阴性．阳 性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆。经甲醛固定保持l～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏， 织细胞中的亚细胞定位具有良好效果，可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分 布研究。DSHDV抗原存在感染细胞浆，肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官。 关键词：间接免疫荧光：鸭病毒性肿头出血症病毒；检测：抗原定位 EstablishmentoftheIndirect Preliminary Immunofluorescencefor Assay Detecting DSHDVinParaffm-embeddedTissuesand Localization Antigen ZHANG She-yu。．CHENGAn-ehunl-．WANG Ming-shul。,3,SHENGChart-juanl．LiChuan．fen91 程安春和汪铭书为通讯作者。下EL：0835·2885774．FAX：0835·2885774．E-mail 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次学术研讨会论文集(下册)(2008年河南新乡) (1AvmnDiseaseResearch ofAnimalScienceand Medicine，Sic