白细胞介素1β刺激对脑微血管内皮细胞COX活性、mRNA表达和PGE2释放的影响.pdfVIP

维普资讯 · 71O · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(4)：710—714 [文章编号】 1000—4718(2007)04—0710～05 白细胞介素 1I3}刺激对脑微血管内皮细胞 COX活性、 mRNA表达i~IPGE2释放的影响术 郭建友 ， 霍海如 ，赵保胜 ，‘ 刘洪斌 ，‘ 李兰芳 ，‘ 郭淑英 ，‘ 姜廷 良 ‘ (中国中医研究院中药研究所唐氏中药研究中心，北京 100700； 中国科学院心理研究所，北京 100101) [摘 要】 目的：探讨白细胞介素 1p(IL一1p)刺激不同时间对大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)的环氧合酶 (COX)活性及其mRNA表达和PGE释放的影响。方法：建立rCMEC培养，进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。细胞长至融 合状态后加入 IL一1p(30 g／L)，分别刺激0．5、1、2、4、8、12、24h，ELISA测定细胞内COX一1、COX一2的活性及细 胞外液PGE含量 ，荧光实时定量PCR检测 COX一1、COX一2的mRNA表达量，扩增产物进行熔解曲线图及琼脂糖 电泳分析，并与未刺激的rCMEC作比较。结果 ：①VS因子抗体免疫组化染色可见90％以上的培养细胞呈阳性，确 认为rCMEC。②1L一1p刺激4h时细胞培养液PGE含量已明显高于未刺激组(P0．05)；12h时PGE含量达到最 大值(P0．01)；24h时PGE2含量有所回降，但与未刺激组比较仍有显著差异(P0．05)。③IL一1p刺激不同时 间rCMEC内COX一1活性与未刺激组相比无统计学差异(P0．05)；COX一2活性在第8h时已明显高于未刺激组 (P0．05)，12h活性达峰值 (P0．O1)，24h活性有所回降，但仍具显著差异(P0．05)。④IL一1B刺激不同时 间COX一1mRNA表达与未刺激组比较无明显差异(P0．05)；未刺激组在本实验条件下未检测到COX一2mRNA 表达，IL一1p刺激 1h时可见 COX一2mRNA表达，4h时 COX一2mRNA表达至峰值 ，而后开始回降，第 12h时已 未见表达。熔解曲线图显示无非特异性扩增 ；琼脂糖电泳可见扩增基因与 目的基 因长度相符，结果与荧光定量 PCR一致。结论：IL—IB作用下，rCMEC释放的PGE：持续增加并于12h达峰值，这一过程主要与COX一2mRNA 表达激活及COX一2活性增加有关。 [关键词] 白细胞介素 1；脑；内皮细胞；前列腺素E类；环氧合酶一2 [中图分类号] R363 [文献标识码] A StudyonCOX activityanditsmRNA expression，andPGE2releasefrom cerebralmicrovascularendothelialcellsstimulatedbyIL一1B GUOJian—you ，HUO Hai—ru ，ZHAO Bao—sheng ，LIU Hong—bin ，LILan— fang ，GUOShu—ying，JIANGTing—liang (TangCenterforHerbalMedicineResearch，InstituteofMateriaMedwa，ChinaAcademyofTCM，Bejiing100700，Chi一 ， ；]nstituteofPsychology，ChineseAcademyofSciences，Beijing100101，China．E—mail：hrhuo@sohu．coFn) [ABSTRACT] AIM：Tostudythecyclooxygenase(cox)activityanditsmRNAexpression，andPGE2release fromratscerebralmicrovascularendothelialcells(rCEMC)stimulatedbyIL一1B(3O g／L)atdifferenttimes．METIt- ODS：rCMECwere cultured，nadidentifiedbyimmunohistochemistryforyonWillebrandfactor(Ⅷ factor。amarkerf