绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(6)：l141．1147 · l141 · [文章编号] 1000-4718(2014)06-1141．07 · 实验技术 · 绿色荧光蛋 白转基因小鼠不同源性间充质干细胞 原代培养及生物学特性比较 辛 毅， 李 娜 ， 张 颖， 黄益民， 刘 飒， 许秀芳， 张兆光 (首都医科大学附属北京安贞医院，北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室，北京 100029) [摘 要] 目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞 (MSCs)的体外分离培养方 法 、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用 Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法 分离骨髓 MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点，运用生长曲线和MTr法检测其原代细 胞增殖能力 ，台盼蓝法测定细胞传代成活率，采用流式细胞术测定2种第3代 (P3)细胞DNA周期及表面标志物的 表达，并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果：酶消化法分离培养的脐带 MSCs1d后，细胞贴壁呈成 纤维形 ，2d后呈漩涡状生长且增殖明显，3d后达80％融合即可传代；应用密度梯度离心法分离骨髓 MSCs，体外培 养4d后 ，细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长，5d后呈克隆样生长且增殖明显，7d后达80％融合即可传代。原 代培养的脐带MSCs生长曲线近似 “S”形，骨髓MSCs生长曲线较平缓；MTY法显示脐带MSCs在3—5d增殖较明 显，骨髓MSCs7d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96％以上，Go／G 期细胞均为85％以上，无明 显差异(P0．05)；2种P3细胞CD44、CD90和 CD105阳性率均为(60．7±2．3)％以上高表达，CIM5、CD19、CDI4 和CD79a均为 (25．6±4．8)％低表达 ，两者无明显差异 (P0．05)；2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细 胞分化的潜能，脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90％以上 ，与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异 (P 0．05)。结论：脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋 白转基因小鼠的脐带MSCs 可作为较好干细胞示踪的细胞源。 [关键词] 脐带 ；骨髓；间充质干细胞；生物学特性；绿色荧光蛋白；转基因小鼠 [中图分类号] R392-33；Q254 【文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．06．032 Biologicalcharacteristicsofmesenchymalstem cellsfrom differentre- sourcesin green fluorescentprotein transgenicmice XIN Yi，LINa，ZHANG Ying，HUANG Yi—min，LIU Sa，XU Xiu-fang，ZHANG Zhao- guang (DepartmentofMolecularBiology，BeijingAnzhenHospitalAffiliatedtoCapitalMedicalUniversity，BengInstituteof Heart，LungBloodVesselDiseases，Be0ing100029，CMrm．E-mn豇：L／na82002@163．Corn) [ABSTRACT] AIM：Tocomparethebiologicalcharacteristics，surfacemrakersandmulti-differentiationpotential ofthemesenchymalstemcells(MSCs)derivedfromtheumbilicalcordandbonemSJTOWinthegreenfluorescentprotein (GFP)transgenicmice．