氯化锂对人滑膜成纤维细胞增殖影响.pdfVIP

垦瘟堡生理盘查 se OfPl{thophysiology 2010，26(8)：1640—1642 [文章编号] 1000—4718(2010)08—1640—03 氯化锂对人滑膜成纤维细胞增殖影响木 肖楚吟， 潘云峰 ， 郭兴华， 吴玉琼， 黄建林， 古洁若 (中山大学附属第三医院风湿科，广东 广州510630) [摘 要] 目的：研究Wnt／31一catenin通路激活剂氯化锂 (LiC|)对成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方 法：收集关节创伤患者行关节腔镜或关节置换术膝关节滑膜标本3例，采用酶消化法进行关节滑膜 FLS的原代细 胞培养，应用LiC1对细胞进行刺激，应用MTY法检测关节创伤患者 FLS细胞增殖的改变。结果：MTY法检测显示， 10mmol／LLiCI刺激后，关节FLS的吸光度较非刺激状态下增高，差异显著 (P0．05)。20—40mmol／LLiCl抑制 FLS细胞增殖 (P0．05)。结论：低浓度LiC1可能通过激活Wnt／31一catenin通路促进关节创伤患者FKS细胞增 殖，高浓度LiC1抑制FKS细胞增殖。 【关键词] 氯化锂；13一黏连素；滑膜；细胞增殖 ；Wnt通路 [KEYWORDS] Lithiumchloride；B—catenin；Synovialmembrane；Cellproliferation；Wntpathway [中图分类号】 R593 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．038 Wnt／31一catenin通路是Wnt／Fz信号转导的4条通路之 加入适量 PBS，吹打混匀后细胞计数，于 1000r／rain离心 一 ，在细胞活化、黏附、增殖 中具有重要作用。已有研究发现 5min，去上清，加入适量20％FBS培养液 (杭州四季青公司， 类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis，RA)成纤维样滑膜细胞 按 1：4与 RPMI一1640培养液配制)，吹打混匀后，于5％ (fibroblast—likesynoviocyte，FLS)中Wnt信号分子表达升高， CO：、37℃培养箱中静置培养48h。根据细胞的生长情况及 并介导某些细胞因子在RA—FLS中的表达增加，致使RA— 培养液的变化，每 1—3d更换培养液 1次。 FI_．S增殖能力升高，具有逃脱接触抑制并增强侵袭的能力。 当细胞生长至覆盖底面 80％时，吸弃培养液 ，用PBS 基于RA—FKS和 13一catenin的特性以及前人的研究结果，提 轻轻洗3次，加入胰蛋 白~／EDTA溶液 (吉诺生物公司，含 示 B—eatenin可能参与了FKS增殖机制。本文通过应用氯化 0．25％胰蛋 白酶、0．02％EDTA)覆盖底面。显微镜下观察至 大部分细胞变圆后将培养瓶竖起，加入适量 10％FBS培养液 锂 (LiC1，一种Wnt／31一catenin通路的激活剂)对成纤维细胞 (杭州四季青公司，按 1：9与RPMI一1640培养液配制)终止 样滑膜细胞进行刺激，研究Wnt／B—catenin通路的激活对成 消化，吸管吹打后移至 15mL离心管中，1000r／rain离心 纤维细胞样滑膜细胞增殖的影响。 5rain，弃上清，加入适量 10％FBS培养液吹打混匀后，按 1：3 材 料 和 方 法 传代，分装接种到培养瓶中，置于5％CO 、37℃培养箱中培 养。根据细胞的生长情况及培养液的变化，每 1—3d更换培 1 标本来源 养液 1次。若杂质较多，换液前用PBS轻轻洗 1—2次。 关节创伤病例来 自于2007年 12月一2009年3月