青蒿琥酯通过抑制ERK1%2f2蛋白活化负性调控HSC-T6细胞cyclin+D1的表达和AP-1活性.pdfVIP

· 94 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysi0Iogy 2012，28(1)：94—99 [文章编号] 1000—4718(2012)01—0094—06 青蒿琥酯通过抑制 ERKI／2蛋白活化负性调控 HSC—T6细胞 cyclinD1的表达和 AP一1活性 来丽娜 ， 宋晓亮 ， 任泽恩 ， 杨柳絮 ， 王黎 4， 郑王巧 ， 郭春花 ， 张晓一 (长治医学院 药理教研室，肝病研究所，机能实验室，长治市第二人民医院，山西 长治046000) [摘 要] 目的：通过观察青蒿琥酯(artesunate，Art)对肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)细胞外信号调 节蛋 白激酶 1／2(extracellularsignal—regulatedkinase1／2，ERK1／2)、激活蛋 白1(activatorprotein1，AP一1)和细胞周 期蛋白Dl(cyclinD1)的影响，探讨 Art抗肝纤维化的分子机制。方法：用血小板源性生长因子 BB(platelet—de— rivedgrowthfactorBB，PDGF—BB)诱导HSC—T6细胞的增殖。实验分为对照组、PDGF—BB组 、PDGF—BB+Art 组(Art终浓度6．25mg／L、25mg／L、50ms／L)和PDGF—BB+ERK抑制剂PD98059组。ELISA法测定细胞上清液 中I型胶原的含量，RT—PCR检测各组ERK1／2和 cyclinD1mRNA水平变化，Westernblotting法检测各组 P— ERK1／2和cyclinD1蛋白表达水平，凝胶电泳迁移率实验 (EMSA)检测AP一1的活性。结果 ：(1)PDGF—BB可明 显促进HSC—T6细胞的增殖，PDGF—BB+Art各剂量组和PDGF—BB+PD98059均可抑制 HSC—T6细胞上清液 中I型胶原的含量 (P0．05，P0．01)。(2)PDGF—BB+Art组(50mg／L)ERK1／2mRNA的表达低于PDGF—BB 组(P0．05)，其中PDGF—BB+PD98059组ERK1／2mRNA的表达最低 (P0．O1)；PDGF—BB+An组 (25mg／L、 50mg／L)和PDGF—BB+PD98059组cyclinDImRNA的表达明显低于 PDGF—BB组 (P0．05，P0．01)。(3) P—ERK1／2、cyclinD1蛋白表达水平在PDGF—BB组最高，而 PDGF—BB+Art各剂量组和PDGF—BB+PD98059 组降低(P0．05，P0．01)。(4)Art可使AP一1与DNA结合活性下降。结论：Art可抑制HSC—T6细胞增殖，其 机制可能与其抑制ERK1／2蛋白活化从而降低AP一1的活性和下调cyclinD1的表达有关。 [关键词】 青蒿琥酯；肝星状细胞；细胞外信号调节激酶1／2；胶原，I型；细胞周期蛋白D1；激活蛋白1 [中图分类号] R285．5；R575．2 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．01．018 Artesunatenegatively controlsexpression ofcyclin D1 and activity 0f AP一1byinhibitingtheactivationofERK1／2protein inHSC —T6cells LAILi—na 。SONG Xiao—liang ，REN Ze—en ，YANG Liu—xu ，WANG Li—min ， ZHENG Wang—qiao ，GUO Chun—hua ，ZHANG Xiao—yi (DepartmentofPharmacology，InstituteofHepatology4FunetiomzlLaboratoryof Medicine，ChangzhiMedicalCol— lege，ChangzhiNo．2PeoplesHospital，Changzhi046000，China．E—mail：lailina@126．con) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheeffectsofartesunat