缺血性脑中风钙依赖性激活Raf-1／ERK的级联机制研究.pdfVIP

· 1752· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(9)：1752—1755 【文章编号】 1000-4718(2009}09—1752—04 缺血性脑中风钙依赖性激活 Raf一1／ERK 的级联机制研究冰 李 萌 ， 鲁宏标 ， 邱天竹 ， 许佳丽 ， 郭 军 (南‘京医科大学附属南京儿童医院检验科，江苏 南京 210008；南京医科大学 基础医学实验教学中心， 基础医学院生化与分子生物系，江苏南京 210029) [摘 要] 目的：研究Raf一1磷酸化与脑缺血诱导的ERK钙依赖性激活的联系。方法：采用4动脉阻断法 诱导大鼠前脑缺血，用免疫印迹技术观察缺血／再灌后海马组织Raf一1和ERK磷酸化的变化，以及钙通道抑制剂 氯胺酮对它们活性的影响。结果：缺血／再灌 15min，海马 内ERK活性显著升高，而 Raf一1的Ser259而不是 Tyr340和Ser338位点磷酸化显著降低；氯胺酮能阻断缺血后 Raf一1(Ser259)的去磷酸化，继而抑制 Raf一1／ERK 活性。结论：脑缺血通过钙依赖性地诱导Raf～1Ser259位点的去磷酸化，暴露其催化结构域，从而导致 ERK级联 的活性上调。 [关键词] 脑缺血；Raf一1磷酸化；细胞外信号调节激酶类 【中图分类号] Q786 [文献标识码] A M echanismsunderlyingcalcium dependentactivationoftheRaf——1／ERK cascadefollowingcerebralischemia LIMeng，，。 LUHong—biao，QIUTian—zhu。，XUJia—li，GUOJun。 ， (DepartmentofLaboratoryExamination，NanjingChildrensHospital，NanfingMedicalUnivemi@，Nanjing210008，Chi- 舳； LaboratoryCenterforBasciMedcialSciences，DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，Nanjing胁靠 calUniversity，Nanjing210029，China．E—mail：Guo．~／9@yahoo．eom．cn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetherelationshipbetweenRaf一1phosphorylationandcalcium—dependent ERKactivationfollowingcerebralischemia．METHODS：Four—vesselocclusionmethodwasusedtoinduceforehrainis- chemiainrats．ImmunoblottingassayWas employedtoobservethephosphorylationlevelofRaf一1andERK inhippoeam- pusafterischemia—reperfusion，andtheiractivityafterthetreatmentofketamine．RESULTS：TheactivationofERK ex— hibitedasignificantelevationinresponseto15minreperfusioninhippocampusafterischemia，whilethephosphorylationof Raf一1atSer259ratherthna Ser338orTyr340decreasedsignificantly．KetamineblockedthedephosphorylationofSer259 OilRaf一1afterischemia，andthensuppressedtheactivationofRaf 一1／ERK．CONCL