疏肝健脾方药对NASH大鼠Kupffer细胞NF-κB+p65和IKKβ+mRNA及蛋白表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(4)：641-646 · 641 · [文章编号] 1000-4718(2013)04-0641—06 疏肝健脾方药对 NASH大鼠Kupffer细胞 NF-KBp6S和 IKKI~mRNA及蛋 白表达的影响 韩 莉 ， 杨钦河 ， 杨雪松 ， 胡巢凤 ， 张玉佩 ， 冯高飞 ， 王文晶 ， 何秀敏 ， 王彦平 ， 程少冰。， 金 玲 ， 闫海震 ， 黄 进 (暨南大学 附属第一医院，医学院中医系，医学院组胚系再生医学教育部重点实验室，医学院病理生理学系、 国家中医药管理局病理生理三级实验室，广东 广州510632) [摘 要] 目的：探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠Kupffer细胞核因子KB(NF-IcB)p65 和 IKB激酶B(IKK31)mRNA及蛋 白表达的影响。方法：采用高脂饲料喂养复制大鼠NASH模型，在施 以造模 因素 的同时分别灌服疏肝方 (柴胡疏肝散)、健脾方 (参苓 白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓 白术散的合方)的高、低 剂量进行干预，l6周后分离Kupffer细胞 ，Typanblue染色和流式细胞术(rcta)分别对Kupffer细胞进行活性和纯度 鉴定；实时定量PCR法检测Kupffer细胞IKK31和 NF—KBp65mRNA的表达水平；Westernblotting法检测Kupffer细 胞 IKK31、P-IKK31和NF-zBp65蛋白水平。结果：每只大鼠获得纯化的Kupffer细胞 (1．5—2．0)×10，Typanblue 染色显示这些细胞活力均在95％以上 ，FCM检测纯度均在90％以上；与正常组比较，模型组Kupffer细胞IKK31mR． NA及蛋白的表达水平均明显升高(P001)；与模型组比较 ，高剂量综合方、健脾方和疏肝方组IKK31mRNA的表 达水平下调明显 (P0．01或P0．05)；IKK31及磷酸化蛋白的表达水平以高剂量健脾方组下降最为显著 (P 0．01或P0．05)；与正常组比较，模型组 Kupffer细胞 NF—KBp65mRNA及蛋白的表达水平均明显升高 (P 0．01)，与模型组比较 ，NF—KB065mRNA的表达水平以综合方组及高剂量健脾方组下调明显 (P0．05)，NF—KB p65蛋白的表达水平以高剂量健脾方组下降最为显著 (P0．01)。结论：Kupffer细胞 IKK3[、NF—KBp65mRNA及 IKK31、P．IKK31、NF．KBp65蛋白的高表达可能参与NASH的发病，抑制这些信号分子的表达可能是疏肝健脾方药抗 NASH的重要机制之一。 【关键词] 非酒精性脂肪性肝炎；疏肝健脾方药 ；Kupffer细胞；核因子KB；IKB激酶 B [中图分类号] R575．5 [文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．40．012 EffectsofShu-ganJian-piprescriptionsonexpressionofNF—KBp65and IKKItatmRNAandproteinlevelsinKupffercellsfrom rats thnon-ai- coholicsteatohepatitis HANLi，YANGQin—he，YANGXue-song，HUChao—feng*，ZHANGYu-pei，FENG Gao—fei，WANGWen-jing，HEXiu—min，WANGYan．ping4，CHENGShao—bing2，JIN Ling ．YANHai．zhen ，HUANGJin (TheFirstAffiliatedHospital，DepartmentofTraditionalChineseMedicine，SchoolofMedicine， KeyLaboratoryforRe— generativeMedciineof 打yofEducation，DepartmentofHistologyEmbryoloyg，SchoolofMedicine，Departmentof