下调+p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(6)：975-981 · 975 · [文章编号] 1000—4718(2014}06—0975-07 下调 p21活化蛋 白激酶 2表达对人乳腺癌细胞 增殖和凋亡的影响球 李 翔， 张晓艳， 赵继敏， 刘康栋， 赵明耀， 董fi-4 (郑州大学基础医学院病理生理学教研室，河南 郑州 450001) [摘 要] 目的：应用 RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2(PAK2)的表达 ，观察 其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建针对 基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病 毒颗粒 ，感染MCF-7细胞 ，筛选获得稳定细胞株。Westernblotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变；CellTiter 96AQueous法和软琼脂集落形成实验检测 MCF-7细胞体外增殖能力的改变 ；流式细胞术检测十字孢碱诱导的 MCF-7细胞凋亡的变化。结果：MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后 ，PAK2蛋白表达量明显下降(P0．01)，与阴性 对照组相比，sh-PAK2组细胞生长明显减缓 (P0．01)，克隆形成的数 目和大小明显下降(P0．01)，十字孢碱诱导 的细胞凋亡率显著增加 (P0．O1)。结论 ：通过RNA干扰技术下调 的表达，可抑制MCF-7细胞的生长和增 殖 ，并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。 [关键词】 p21活化蛋白激酶2；乳腺肿瘤；RNA干扰；细胞增殖 ；细胞凋亡 [中图分类号] R737．9 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2014．06．003 Effectsofp21一activatedproteinkinase2down-regulationonproliferation andapoptosisofhumanbreastcancercells n，UU Kang—dong，ZHAO Ming-yao，DONGZi- LIXiang，ZHANGXiao—yah，ZHAOJi—mi ． mmg (DepartmentofPathophyso／o／gy，BasciMedicalCollegeofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China．Em·ail： dongzm@删 ．edu．ca [ABSTRACT] AIM ：Tostudytheeffectofp21-activatedproteinkinase2( )knockdownbyRNAinterfer- enceontheproliferationandapeptosisofhumanbreastcancercells．METHODS：TheshorthairpinRNA (shRNA)targe- ting geneWas designedandusedforpackinglentivirusin293Tcells．HumanbreastcancerMCF-7cellswereinfected bythevirusparticlesnad knockdown stablecelllineWas estbalishedbypuromycinselection．Theknockdowneffi · ciencyWasassessedbyWestern blotting．TheproliferationbailityofMCF-7ceils