酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1反义寡核苷酸对泡沫细胞形成的影响.pdfVIP

· 1616· 生国痘理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(8)：1616—1619 [文章编号] 1000—4718(2008)08—1616—04 酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶 1反义寡核苷酸 对泡沫细胞形成的影响木 何 平 ， 成 蓓 ， 戚本玲 (华中科技大学同济医学院协和医院老年病科，湖北 武汉 430022) [摘 要] 目的：观察酰基辅酶 A：胆固醇酰基转移酶 1(ACAT1)反义寡核苷酸对泡沫细胞 (FC)形成的影 响。方法：体外培养人THP一1单核细胞系，由佛波酯 (PMA)作用使其分化为巨噬细胞；并建立过表达ACAT1基 因的THP一1单核细胞系。在脂质体的介导下将针对 ACAT1基因序列的反义和错义寡核苷酸分别作用于上述细 胞6h后加入Ac—LDL进行脂质负荷，以Westernblotting法检测ACAT1蛋白表达，放射性同位素标记底物法检测 ACAT酶活性的变化 ，油红O染色法观察泡沫细胞的形成情况。结果：ACAT1反义寡核苷酸可明显抑制巨噬细胞 和过表达ACAT1基因的THP一1单核细胞内的ACAT酶活性 ，而且可明显抑制Ac—LDL负荷后泡沫细胞的形成； 错义寡核苷酸则无此作用。结论：ACAT1反义寡核苷酸可抑制ACAT的生物学活性及泡沫细胞的形成。 [关键词] 酰基辅酶A；胆固醇酰基转移酶；泡沫细胞；寡核苷酸类 ，反义 [中图分类号] R363 [文献标识码] A EffectofacylcoenzymeA ：cholesterylacyltransferase1antisenseoligonu— cleotidesontheformation offoam cells HEPing，CHENGBei，QIBen—ling (DepartmentofGerontology，UnionHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnoolgy，Wu— han430022，China．E—mail：chengbei81@yahoo．com．cn) [ABSTRACT] AIM：TostudytheeffectofacylcoenzymeA：cholesterylacyltransferase1(ACAT1)antisenseol— igonucleotidesontheformationoffoamcells(FC)．METHODS：THP一1cellswereculturedanddifferentiatedintomac— rophages(MP)byphorbolmyristateacetate(PMA)．Over—expressingACAT1geneTHP一1cellswereconstructed．The ACAT1na tisenseandmissenseoligonucleotidesconductedbyLipofcetamineMT 2000wereincubatedwithabovecells ． Ac— LDLwasadded6h laternadincubatedofr24h．TheexpressionofACAT1proteinwasdetcetedbyW esternblotting．Th e ACATactivitywasmeasuredbyqunati~ingtheincorporationof[1一 “C]oleoylCoAintocholesterylesters．Thefomration ofofam cellswasdetectedbyoilredO