下调X连锁调亡抑制蛋白基因表达增强多西他赛诱导膀胱癌细胞凋亡的作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(3)：427—432 · 427 · [文章编号] 1000-4718(2012)03—0427—06 下调 X连锁调亡抑制蛋白基 因表达增强多西他赛 诱导膀胱癌细胞凋亡的作用木 卢 瑜 ， 方 勇 (南京军区杭州疗养院，浙江 杭州 310007；浙江大学医学院附属邵逸夫医院肿瘤内科 ，浙江 杭州 310016) [摘 要] 目的：观察人源性膀胱癌细胞在下调 X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达后 ，多西他赛对其敏 感性的影响。方法：以shRNA和shRNA—XIAP质粒分别稳定转染人源性膀胱癌 T24T细胞。以荧光显微镜观察 转染细胞。以RT—PCR和Westernblotting法分别检测膀胱癌细胞XIAPmRNA和蛋白的表达。与T24T以及转染 空载体的T24T细胞相比较 ，以ATPase法检测多西他赛对转染XIAP基因的膀胱癌细胞的细胞毒性。相差显微镜 下观察 ，流式细胞术检测多西他赛预处理转染XIAP基因的膀胱癌细胞的凋亡率；以Westernblotting法检测细胞内 的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和caspase一3蛋白表达和裂解水平。结果：荧光显微镜下分别观察 shRNA和 shRNA—XIAP转染的T24T细胞，均见稳定荧光。Westernblotting和RT—PCR检测结果显示，人源性膀胱癌T24T 细胞在稳定转染反义XIAP基因后 ，其XIAP蛋白和mRNA水平均显著降低。经多西他赛处理24h后，转染反义 XIAP基因的T24T细胞 IC。为 (1．23±0．62)nmoL／L，远低于T24T以及转染空白载体的对照组细胞 [(8．22±1．23) nmol／L，(8．354-0．98)nmol／L，P0．01]。流式细胞术检测结果显示 ，T24TshRNA—XIAP细胞组 (2nmol／L和5 nmol／L)凋亡率[(41．45±6．23)％和(74．82±5．46)％]显著高于转染空载体细胞的凋亡率[(25．34±3．81)％和 (34．14±6．25)％，P0．O1]。与转染空载体的细胞相 比较，T24TshRNA—XIAP细胞内的PARP和caspase一3明 显降低。结论 ：下调膀胱癌细胞的XIAP基因表达后，可显著增强化疗药物多西他赛所诱导的膀胱癌细胞的凋亡， 并增强多西化赛的细胞毒性。 [关键词] T24T细胞 ；x连锁凋亡抑制蛋白；多西他赛；细胞凋亡 [中图分类号] R73 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．03．008 Effectsofdown—regulation 0fX —linked inhibitorofapoptosisprotein geneondocetaxel——inducedapoptosisinbladdercancercells LU Yu ．FANG Yong (HangzhouSanatoriumofNanjingMilitaryRegion，Hangzhou310007，China；DepartmentofMedicalOncology，SirRun RunShawHospital，SchoolofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou310016，hCina．E—mail：fyzju@sina．con) [ABSTRACT] AIM：Toobservetheeffectsofdown—regulationofX—linkedinhibitorofapoptosisprotein(XI- AP)geneonthechemotherapeuticsensitivityofbladdercancercells．METHODS：TheshRNAnadshRNA—XIAPwere transfectedintobladdercancerT24Tcells．Thefluorescencemicroscopywasusedtodetectthetr