血管生长素-1基因慢病毒载体的构建及其在间质干细胞的表达.pdfVIP

维普资讯 · 1618· 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo~ 2007,23(8)：1618-1622 [文章编号] 1000—4718(2007)08—1618—05 血管生长素 一1基因慢病毒载体的构建及 其在间质干细胞的表达 ：l： 陈柏龄 ．一， 张志坚 ， 黄东煜 一， 吴秀丽 ， 张彦定 (福建医科大学第一临床学院，福建 福州350002； 福建省神经病学研究所 ，福建医科大学附属第一医院， 福建 福州350005； 福建师范大学生物工程学院，福建 福州350007) [摘 要] 目的：构建带有血管生长素一1(Ang—J)基因的慢病毒载体并实现该基因在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSCs)中的表达。方法：RT—PCR获得大鼠Ang—J基因，限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒 PNL—AnE—J—IRES，一EGFP，在脂质体介导下与包装质粒HELPER，包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产 慢病毒颗粒并感染 rMSCs。PCR检测Ang—J基因的插入，细胞 RT—PCR检测Ang—JmRNA表达，免疫细胞化学 和Westernblotting检测Ang一1蛋白的表达。结果：所获Ang—J基因经测序证实与GenBank报道的序列一致。慢 病毒载体质粒 PNL—Ang—J—IRES2一EGFP经SalI和BamHI双酶切后电泳显示 1512bpAng—J目的基因片段和 1O．5kbPNL—IRES，一EGFP载体片段。病毒基因组PCR证实Ang—J基因插入。荧光显微镜观察到EGFP表达。细 胞 RT—PCR检测到Ang—JmRNA表达。免疫细胞化学和Western blotting检测到Ang一1蛋白表达。结论：成功构 建带有Ang—J基因的慢病毒载体并实现在rMSCs中的表达，为Ang—J基因修饰干细胞的应用研究奠定了基础。 [关键词] 间质干细胞 ；基因，Ang—J [中图分类号] R363 [文献标识码] A ConstructionoflentiviralvectorcarryingtheAng——1geneanditsexpres-· sionintherM SCs CHENBai—ling一，ZHANGZhi—jian一，HUANGDong—yu一，WUXiu—li，ZHANG Yan—ding ( FirstClinicalCollegeofFujianMedcialUniversity，Fuzhou350002，China； F~ianNeurologyInstitute， First dHospitalofFufianFuzhou350005，China； TheBioengineeringCollegeofFujianNormalUniversity，Fuzhou 350007，China．E—mail： 固medma il．corn．ca) [ABSTRACT] AIM：Toconstructlentiviralvectorcarryingtheangiopoietin一1(Ang—J)gene，andmakeitex- pressAng—Jintheratmesenchymalstem cells(rMSCs)．METHODS：ThecDNAencodingtheCDSofAng—Jgenewas obtainedfrom theplacentaoftheadultFisher344ratswithRT—PCR．Afterdigestionwithrestricationendonuclease，the Ang—Jgenewas recombinedtoconstructthetrnasferplasmidPNL—Angl—IRES2一EGFP．Th ethree—plasmidsystem of