荧光分子扩散动态测量在肥大细胞脱颗粒体外检测中的应用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiclogy 2014，30(9)：1717·1723 · l7l7 · [文章编号] 1000—4718(2014)09—1717-07 · 实验技术 · 荧光分子扩散动态测量在肥大细胞脱颗粒 体外检测 中的应用木 孙一宁 ， 孙娅楠 ， 王羽侬。， 张景海 ， 马淑骅 ， 王 毅 (沈‘阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016； 中国中医科学院医学实验中心，北京 100700；北京中医药大学，北京 100029) [摘 要] 目的：建立基于荧光分子扩散动态测量的肥大细胞脱颗粒的体外快速评估方法。方法：分别采用 B．己糖苷酶法、扫描电镜法及光栅图像关联光谱法 (rasterimagecorrelationspectroscopy，RICS)对稳定表达CD63一绿 色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)的大鼠肥大细胞株 RBL-2H3的脱颗粒过程进行评价 ，比较不同检测方 法的灵敏度。结果：31-己糖苷酶法的检测灵敏度为5ms／L，扫描电镜法的检测灵敏度均为3．9×10一mg／L，RICS 方法也在3．9×10 mg／L即可检测到扩散系数的降低 ，并与未给药组有显著差异。结论 ：RICS方法 比传统 B-己 糖苷酶法更灵敏，虽然与电镜方法灵敏度相当，但该方法较扫描电镜法简便易行成本低 ，易操作，且所观察的指标 为扫描电镜所不能做到的活体动态观测 ，能在细胞脱颗粒早期即可判定过敏反应的发生，具有传统方法不具备的 优势，有潜力成为制药企业质量控制的标准方法，或临床过敏性物质筛查的有利工具。 [关键词] 荧光相关光谱；光栅图像关联光谱法；扩散系数；肥大细胞脱颗粒 [中图分类号] R331 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．09．031 Detection ofmastcelldegranulation by fluorescentmolecular diffusion dynam icm easurem ent SUN Yi-ning，SUN Ya—nan ，WANG Yu-nong，ZHANG Jing-hai，MA Shu—hua， WANG Yi (’SchoolofLfieSciencesandBwpharmaceu~cis，ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang 110016，China； ExperimentalResearchCenter，ChinaAcademyofChineseMedicalSceinces，Beng100700，hCina；Be~iingUnive~ityof TraditionalChineseMedicine，Beijing100029，China．E-mail：wangyi02@gmail．corn) [ABSTRACT] AIM：Toestablisharapidinvitromethodformastcelldegranulationtracingbyrasterimagecorre- lationspectroscopy(RICS)．METHODS：RBL-2H3，abasophilicgranul0cytemastcelllinetransfectedwithCD63-GFP plasmid，Wasusedforevaluatingthemethods，including31-hexosaminidase(HEX)eolorimetricassay，scanningelectron microscopy(SEM)andRICSinthedetectionofmastcelldegrnaulation．Thesensibilities