应用亲和磷酸蛋白质组学筛选氧化应激重塑型LPS通路的侯选信号分子.pdfVIP

维普资讯 志 ChineseJournalofPathophysiol~ogy Q!三(鱼)； = · l189 · [文章编号] 1000-4718(2007)06—1189—06 应用亲和磷酸蛋 白质组学筛选氧化应激重塑型 LPS通路的侯选信号分子术 邹志鹏 ， 潘 婷 ， 李煜生 ， 刘 炜 ， 朱振宇 ‘， 姜 勇 (南方医科大学 。细胞生物教研室，病理生理教研室，广东 广州 510515； 中山大学中山医学院 蛋白质组学实验室， 生化与分子生物学教研室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：研究低剂量 LPS刺激的Thp一1细胞在有或无 H：O：预处理时磷酸化蛋白组的差异，以初步 筛选氧化应激重塑型LPS通路中的新信号分子。方法：使用PMA刺激Thp一1单核细胞 36h使之分化成为成熟 的巨噬细胞，静息36h后，先以等体积的培养基或 100izmoL／LH：O：刺激 1h，再以培养基或 l0 LLPS刺激 30min。采用PMAC(phosphoproteinmetalaffinitycolumn)富集各组细胞的磷酸化蛋白质，经超滤除盐后进行二维 凝胶电泳，比较LPS组和H：O：+LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异，并挑选部分斑点进行质谱鉴定。结果：相对于 LPS组 (仅用LPS刺激的细胞)，在H：02+LPS组 (LPS刺激前经 H：02提前处理的细胞)中，有29个磷酸化蛋白斑 点在双向电泳图谱中表现出可重复的差异，其中，l7个斑点发生了上调 (包括新出现的斑点)，l2个发生了下调 (包 括消失的斑点)。我们已经鉴定出其中5个差异蛋白，这些蛋白参与多种多样的细胞过程例如蛋白质降解、信号转 导和蛋白质折叠等。其中，在HO：+LPS组中显著下调的proteasomebeta一4亚基与 LPS信号传递关系密切。结 论：亲和磷酸蛋白组学有效减少了高丰度的结构蛋白的干扰并增加了信号分子检出的可能性。上述5个蛋白尤其 是proteasomebeta一4亚基可能是氧化应激重塑型LPS通路的重要调节分子。 【关键词] 脂多糖类 ；电泳；氧化性应激；磷酸化蛋白质组学 [中图分类号] Q257；R363．2 1 [文献标识码] A Screenofnovelcandidateregulatorsinvolved in oxidativestress-··repro· grammedLPSsignalingpathwaybycomparativephosphoprotein -··affini· typrofiling ZOU Zhi—peng ，PAN Ting ，LIYu— sheng2 LIU Wei，ZHU Zhen—yu ，JIANG ， Yong2 (。DepartmentofCellBiology，DepartmentofPathophysoiolyg ，SouthernMedicalUni~rsity，Guangzhou510515，China； ProteomicsLaboratory。DepartmentofBiochemistryandMolecularBoiolyg，ZhongshanMedcialColelge，SunYat—sellU- niversity，Guangzlwu510080，hC ina．E—mail： @ lnn,lu．corn；yon~iang@fimmu．corn) [ABSTRACT] AIM：TodeterminethedifferencesinphosphoproteomebetweenLPSstimulatedTHP一1ceHswiht andwihtoutpreviousoxidativestressforscreeningofmore p