用RNA-RNA原位杂交技术研究Robo2在早期鸡胚发育中的表达.pdfVIP

· 2368· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(12)；垫 = ! [文章编号] 1000—4718(2010)12—2368—05 用 RNA—RNA原位杂交技术研究 Robo2在 早期鸡胚发育中的表达 林艳青’， 亓翠玲 ， 吴 婷 ， 徐 涛 ， 韩 哲 ， 王尽淘 ， 耿建国 ， 杨雪松 ， 王丽京 (广东药学院血管生物学研究所，广东 广州510006；暨南大学医学院组胚系再生医学教育部重点实验室 ，广东 广州510632) [摘 要] 目的：探讨Robo2(roundabouthomolog2)在早期鸡胚发育中的表达。方法：利用分子生物学手 段 ，构建Robo2／pSPT18重组质粒，并且制备地高辛标记的Robo2RNA探针，进而通过RNA—RNA原位杂交技术检 测 Robo2在早期鸡胚发育中的表达。结果：原条发生前 Robo2表达较弱，原条发生后主要表达在原条和神经板。 体节期 Robo2主要表达在脊索、神经管、体节和血岛部位。冰冻切片后观察到Robo2主要表达在外胚层，而在中胚 层和内胚层只有部分表达。结论：阐明了Robo2在早期鸡胚发育中的表达，为进一步研究Robo2在正常生理和病 理条件下的功能及作用机制奠定基础。 [关键词] Roundabouthomolog2；早期鸡胚；RNA探针；原位杂交 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．12．016 Theexpression pattern ofRobo2 in early chick embryosusingRNA -- RNA insitu hybridization LINYan—qing，QICui—ling，WUTing。，XUTao。，HANZhe，WANGJin—tao， GENGJian—guo，YANGXue—song，WANGLi—jing (’InstituteofVascularBiologicalSciences，GuangdongPharmaceuticalUnivemi~，Guangzhou510006，China；KeyLabo— ratoryforRegenerativeMedciineofTheMinistryofEducation，DepartmentofHsitologyandEmbryology，SchoolofMedicine， JinanUniversity，Guangzhou510632，China．E—mail：wanglifing62@yahoo．corn．c12；yang_xuesong@ 126．con) A『BSTRACT] AIM ：Tostudytheexpressionpatternofroundabouthomolog2(Robo2)intheearlychickembry— OS．METHODS：TheplasmidsofRobo2／pSPT18wereconstructedandthedigoxigenin(DIG)一labeledsenseandanti— senseRNA probeswereproducedbyinvitrotranscriptionaccordingtoastandardprotoco1．Finally，theexpressionpattern ofRobo2 intheeralychickembryoswasinvestigatedusingRNA ——RNA insituhybridizationwiththesynthesizedprobes． RESULTS：Atpre—streakstage，theexpressionofRobo2wasweak．Afterprimitivestreakformed，Robo2wasmainlyex— pressedintheprimitivestreakandneuralplate．Atsomitestage，strongexpressionofRobo2inthenotochord，neuraltube， somitesandbloodisl