应用噬菌体展示技术筛选HMGB1启动子结合蛋白.pdfVIP

· 28 · 主国痘堡生理盘查 GhieseJournalofPathophysiology 2010，26(1)：28—31 [文章编号] 1000—4718(2010)01—0028—04 应用噬菌体展示技术筛选 HMGB1启动子结合蛋 白 丁 宁 ， 肖 慧 ， 高 巨 ， 许立新 ， 余守章 (广州市第一人民医院 麻醉科和麻醉学实验室，门诊部，广东 广州510180； 。广州中医药大学第二附属医院麻醉科，广东广州 510120) [摘 要] 目的：筛选高迁移率族蛋 白B1(HMGB1)启动子结合蛋 白。方法：应用噬菌体展示技术，以 HMGB1启动子DNA作为固相筛选分子 ，对噬菌体展示环七肽库进行4轮 “吸附一洗脱 一扩增”生物筛选 ，从第 4 轮洗脱物中随机挑选20个单克隆噬菌体扩增后进行 ELISA鉴定。对所筛选克隆进行 DNA序列测定和生物信息 学分析。结果：经过4轮筛选后 ，对随机选取的20个噬菌体克隆进行鉴定，其中11个可与HMGB1启动子结合。 DNA测序后经过同源性搜索，确定了与HMGB1启动子具有结合作用的蛋白，包括激活蛋白一1(activatorprotein一 1，AP一1)等6种已知功能蛋白和2种未知功能蛋白。结论：筛选到HMGB1启动子的结合蛋白，为研究 HMGB1基 因的转录调控机制奠定基础。 [关键词] 高迁移率族蛋白1；启动子；噬菌体展示；肽库；基因表达调控 [中图分类号] R378；R392．1 [文献标识码】 A ScreeningofbindingproteinsofHM GB1promoterbyphagedisplaytech- mque DINGNing，XIAOHui，GAOJu。，XULi—xin ，SHEShou—zhang (DepartmentofAnesthesiologyandAnesthesioolgyLaboratory，DepartmentofOut—patient，GuangzhouFirstMunicipal PeoplesHospitd，Guangzhou510180，China；DepartmentofAnesthesoiolgy，TheSecondAffiliatedHospitalofGuangzhou UniversityofTraditoinalChineseMedciine，Guangzhou510120，China．E—mail：gzxulixin@163．corn) [ABSTRACT] AIM：ToscreenthebindingproteinstoHMGB1promoterbyphagedisplaytechnique．METIt- ODS：HMGB1promoterwasincubated with phagedisplay library．Unboundphageswere eluted andphagesbound to HMGB1promoterwereamplified．Twentyindividualcloneswere randomlyselectedandidentifiedbyenzyme—linkedim— munosorbontassay(ELISA)．Positivecloneswerecharacterizde byDNAsequencingandtheseuqencesweresubjectedfor computeranalysis．RESULTS：PositivephagesbindingtoHMGB1promoterwere enrichde after4roundsofbiopanning． Twentyphagecloneswereselectedandelevenclonesofwhichwereidentifide tobindspecificallytoHMGB1promoter．The sequencesinfulllengthwereobtainednadsearchedofrhomologousseuq encesfrom GenBank．Altogethereightcodingse- quencesw