透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2-P30基因免疫中的免疫增强作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(12)：2463—2465 · 2463 · [文章编号] 1000—4718(2009)12—2463—03 透明质酸酶在 弓形虫重组融合抗原 ROP2一P30基 因 免疫中的免疫增强作用术 李文姝 ， 孟锐锋 ， 张丽芳 ， 朱珊丽 ， 闵太善 (温州医学院微生物学免疫学教研室，浙江 温州325032；复旦大学生化与分子生物学实验室，上海200433) [摘 要] 目的：研究透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2一P30基因免疫中的免疫增强作用，初步探讨 透明质酸酶在提高质粒DNA分子免疫效应中的应用潜能。方法：弓形虫重组质粒pcROP2一P30联合透明质酸酶 以及单独的重组质粒pcROP2一P30肌肉注射免疫 BALB／c雌性小鼠，生理盐水和空质粒载体 pcDNA3．1作阴性对 照免疫，免疫3次，间隔3周。免疫结束后 ，以纯化的弓形虫重组蛋白ROP2一P30(rROP2一P30)为检测抗原 ，检测 各免疫组小鼠血清中特异性抗体的形成；cellcountingkit一8(CCK一8)检测免疫鼠脾细胞的增殖活性；硝酸还原酶 法检测免疫鼠脾细胞培养上清中NO的含量。结果：pcROP2一P30+透明质酸酶免疫组特异性抗体生成水平显著 高于其它免疫组 (均P0．叭)；pcROP2一P30+透明质酸酶免疫组小鼠脾细胞受特异性抗原 rROP2一P30刺激后， 其淋巴细胞的增殖明显高于单独的质粒peROP2一P30免疫组(P0．01)；peROP2一P30+透明质酸酶免疫组脾细 胞培养上清中免疫活性分子NO的含量也显著升高 (均P0．01)。结论：透明质酸酶在提高弓形虫DNA免疫效应 方面显示了免疫增强作用，具有发展成为基因免疫的免疫佐剂的潜能。 [关键词] 透明质酸酶；弓形虫；免疫增强 [KEYWORDS] Hyaluronidase；Toxoplasma；Immunoenhancement [中图分类号] R363 [文献标识码] A DNA免疫由于其制备的方便性常被用来作为抗原的递 canavalinA，ConA)、透明质酸酶(Sigma)，HRP(辣根过氧化物 送系统，这种免疫方式能够诱导Thl型的免疫反应和 CD8 酶)标记 山羊抗鼠IgG(杭州联科生物技术有限公司)，cell 的细胞毒性T淋巴细胞免疫反应 ’ ，因而对于细胞内感染 countingkit一8(CCK一8，日本同仁化学研究所)，NO检测试 的病原体 ，如弓形虫感染来说是合适的疫苗选择方案，另一 剂盒 (晶美生物工程有 限公司)，增强型 BCA蛋 白定量试剂 方面，哺乳动物的肌细胞有效吸收质粒DNA分子则决定着 盒 (碧云天生物技术研究所产品)。ELx800酶标 自动检测仪 DNA免疫效应的发挥。蛋白水解酶 一透明质酸酶(hyaluroni， (Bio—Tek公司)。 dase，HAase)，作为天然生物酶，在临床上被用作药物渗透 2 动物 剂，促进皮下组织的通透性 ，利于外来物质的有效进入 。 BALB／c雌性小鼠，6周龄 ，18g±2g，购 自中国科学院上 海实验动物中心，由温州医学院标准化实验动物中心饲养。 鉴于此，本研究拟利用透明质酸酶的通透性 ，协助提高质粒 3 重组蛋白RoP2一P30(rROP2一P30J的纯化 DNA分子在肌肉组织中的扩散和吸收，以本室构建成功的弓 重组质粒pET28b／ROP2一P30在原核体系中表达详见参 形虫重组真核表达质粒 pcDNA3．1／ROP2一P30(pcROP2～ 考文献 j。表达产物通过Ni—NTA离子螯合亲和层析柱，按 P30)作为免疫原，透明质酸酶作为基因免疫 的增强剂，与重 产品说明书进行纯化，BCA蛋白定量试剂盒测定纯化后的蛋 组质粒pcROP