应用mRNA差异显示技术筛选大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型中差异表达基因.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJoumalofPathophysiology 2007，23(11)：2141—2146 · 2141 · [文章编号] 1000—4718(2007)11—2141—06 应用mRNA差异显示技术筛选大 鼠小脑颗粒 神经元凋亡模型中差异表达基 因；Ic 银 巍 ， 黄奕俊 ， 皮荣标 ， 苏兴文 ， 赵灵芝 邱鹏新 ， 颜光美 (中山大学中山医学院 生化教研室 ，药理教研室 ， 中山大学药学院，广东 广州 510089) [摘 要] 目的：应用 mRNA差异显示技术对大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型中差异表达基因进行筛选，克隆 以及鉴定。方法：大鼠小脑颗粒神经元的分离和原代培养；对大鼠小脑颗粒神经元凋亡逆转模型进行荧光mRNA 差异显示逆转录PCR(FDDRT—PCR，fluorescentdifferentialdisplayRT—PCR)；EST片段亚克隆入 pGEM—TEa． syMT ， 克隆后测序并进行序列同源性检索 ；反Northern杂交重鉴定与筛选。结果：通过 DDRT—PCR获得 164个在 小脑颗粒神经元凋亡模型中差异表达的ESTs；对其中的 17个 ESTs进行了克隆并测序；通过反 Northern杂交的初 步筛选初步鉴定出5个阳性片段。结论：阳性差异表达EST的筛选、克隆以及鉴定为神经元凋亡与保护分子机制 研究奠定基础。 [关键词] 细胞凋亡；差异表达基因；小脑；神经元 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Screeningdifferentiallyexpressedgenesinvolved inapoptosisofprimary cultured ratcerebellar granule neuronsby mRNA differentialdisplay RT—PCR YINWei，HUANGYi—jan，PIRong—biao，SUXing—wen，ZHAOLing—zhi，QIU Peng—xin ．YAN Guang—mei (DepartmentofBiochemistry， DepartmentofPharmacology，ZhongshanMedicalCollege，SunYat—senUniversity， SchoolofPharmaceutcialScience，SunYat—senUniversity，Guangzhou510089，China．E—mail：ygm@gSU．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：ToScreenandidentifydifferentiallyexpressedgenesthatinvolvedinapoptosismodelinrat cerebellargranuleneurons(CGNs)．METHODS：Theratcerebellargranuleneuronswereisolatedandprimarilycultured． FluorescentdffierentialdisplayRT—PCR (FDDRT—PCR)W88performedtoscreendffierentiallyexpressedESTsinthe apoptosismodelofprimarilyculturedratCGNs．ESTsweresubclonedintopGEM —TEasy vectornadthensequencde ． Alignmentassayinnon—redunna tdatabaseWas appliedforencodinginfomr ation．ReverseNorthern blottingWas usedto appraisetheresultsfromDDRT—PCR．RESULTS：146 piecesofdifferentiallyexpressedESTswereobtainedbyFDDRT— PCR．17ofthe