应用SELDI-TOF-MS技术对肝损伤模型大鼠血清蛋白质表达谱的比较分析.pdfVIP

维普资讯 · 2476· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(12)：2476—2478 [文章编号] 1000-4718(2007)12—2476—03 应用 SELDI—ToF—MS技术对肝损伤模型大鼠 血清蛋 白质表达谱的比较分析 范新娟 ， 洪 海 ， 唐 芳， 刘 芳， 陈少红， 赵 国强 (中山大学附属第一医院病理科 ，中山大学中山医学院病理学教研室，广东 广州510080) [摘 要] 目的：应用SELDI—TOF—MS技术对肝损伤模型大鼠血清内蛋白质表达谱进行 比较分析，以揭示 肝损伤模型大鼠血清促使骨髓间质细胞向肝细胞方向分化的分子基础。方法：采用2种不同蛋白质芯片CMIO和 IMAC3先对肝损伤模型大鼠血清进行吸附分馏 ，后置入蛋白质芯片阅读机，用激光解吸和离子化飞行时间质谱检 测被富集到芯片样品点上的蛋白质 ，对肝损伤模型大鼠血清和正常大鼠血清间的蛋白质表达谱进行 比较分析。结 果：肝损伤大鼠血清能诱导骨髓间质细胞向肝细胞方向分化。蛋白质芯片一飞行时间质谱 (SELDI—TOF—MS)结 果显示，CMIO芯片共捕获到9个差异蛋白峰，其中有6个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显高于对照组 血清 ，其质荷比(m／z)分别为3480、7888、8275、8528、15101和 15787；另有3个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验 血清中明显低于对照组血清，其质荷比(m／z)分别为8833、12039和 12720。IMAC3芯片共捕获到5个差异蛋白 峰，其中有3个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显高于对照组血清，其质荷比(m／z)分别为3481、15105 和 15792；另有2个蛋白表达峰的峰值在肝损伤实验血清中明显低于对照组血清，其质荷 比(m／z)分别为9018和 11593。结论：肝损伤模型大鼠血清内确实存在差异表达蛋白，这些差异表达蛋 白很可能是决定骨髓间质干细胞 分化方向的 “信号分子”。 [关键词] SELDI—TOF—MS方法 ；骨髓间质干细胞；肝损伤 [KEYWORDS] SELDI—TOF—MSmethod；Bonemarrowstromalstemcell；Liverinjury [中图分类号] R363 [文献标识码] A 干细胞研究已成为当今生命科学领域中的前沿和热点 ， 实验中心)作为实验动物，肝损伤模型的构建按照 Petersen 诱导干细胞向特定组织细胞分化是实现干细胞移植治疗疾 等 经典方法进行。实验组动物 (n：5)先用 2一AAF(2一 病的关键。近年来，人们虽然在干细胞的定向诱导分化方面 acetylaminofluorene)(2．5s／L)灌胃7d，在实验的第 7d再给 进行了大量的探讨 ，并取得了一定的进展，但对体 内干细胞 予腹腔注射半致死量的CC1(carbontetrachloride)，24h后取 激活分化的机制仍知之甚少。我们在前期的研究中发现 ，植 实验组动物血清；而对照组动物 (n=5)则先用花生油灌 胃 入大鼠体内的卵圆细胞可特异地定位于受损伤的肝脏内 。 7d，同样在实验的第 7d给予腹腔注射等量的花生油，24h 进而又发现，肝损伤模型大鼠的实验血清可在体外诱导骨髓 后取动物血清。所有的血液样品均从动物心脏抽取 ，血清分 间质干细胞向肝细胞方向分化，而对照组大鼠血清则无此作 离后部分储存于一80℃低温冰箱中，备用。 用 J。据此我们推测，肝损伤大鼠血清内可能存在与干细胞 2 实验血清对干细胞诱导活性的检测 激活分化相关的 “信号分子”。若能探 明这些 “信号分子”的 分别用实验组和对照组血清对骨髓间质细胞进行诱导 存在，并将其分离，对于骨髓间质干细胞的定 向诱导分化无 分化实验，于诱导的第 11d收取细胞 ，提取全RNA，RT—PCR 疑具有十分重要 的意义。本实验拟采用蛋 白质芯片 一飞行 检测骨髓间质细胞诱导前后丙酮酸激酶 M 一PK和 integrin 时间质谱技术(SELDI—TOF—MS)对肝损伤模型大鼠血清和 — B。的表达特征，确定细胞的分化状态，验