香蕉穿孔线虫28S+rRNA基因D2D3区序列分析.pdfVIP

第27卷第5期 华中农业大学学报 V01．27No．5 of 2008年lO月 Journal Oct．2008，585～589 HuazhongAgriculturalUniversity rRN 2／D 香蕉穿孔线虫28S A基因的D 3区序列分析★ 。． 李 佳1’2’ 彭德良”一 黄文坤D (中国农业科学院植物保护研究所／植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193； ， ，2’中国农业科学院研究生院，北京100081) 摘要采用线虫通用引物D2A和D3B对9个香蕉穿孑L线虫种群的核糖体DNA28S大亚基的D2／D3区进 行了扩增，获得的片段长度约为780 bp．克隆铡序后使用UPGMA法进行聚类分析和构建系统发育树。结果表 明9个线虫种群D2／D3区核苷酸序列相似性为99．13％，其中8个群体的序列与越南报道的香蕉穿孔线虫近源 种(Radopholussp．7B 而RSHN3种群可能来源于另一个地理种群。 关键词香蕉穿孔线虫；28SrRNA基因；D2／D3扩展区域 中图法分类号S432．4+5文献标识码A 文章编号1000-2421(2008)05-0585-05 similis(Cobb) 香蕉穿孔线虫Radopholus 进化研究En]，在各种生物中已有大量应用，在植物 Thorne是一种极具毁灭性的外来入侵线虫，已有寄生线虫中的应用也很多1-10-11]。笔者对香蕉穿孔线 55个国家和国际组织对其实施官方控制，是我国对虫28SrDNA—D2／D3区序列进行研究，旨在明确 外植物检疫对象之一[1]。该线虫寄主植物有350多D2／D3区的核苷酸序列特征，为其系统发育、相近 种，可危害多种农作物和一些观赏植物，使作物减产 种分类和快速分子诊断提供理论依据。 30％～60％，甚至绝收[2|。近年来，随着我国加入 1材料与方法 wT0，农产品国际贸易往来迅速发展、人员交流的 日益频繁和旅游业的发展，从香蕉穿孔线虫疫区国 1．1供试线虫 家或地区引进香蕉、花烛、肖竹芋、红掌、芭蕉及鹤望 共收集9个香蕉穿孔线虫种群(表1)。其中 兰等花卉苗木及种质材料的种类和数量迅速增加， RSsH、RSHL香蕉穿孔线虫种群为中国检疫科学 该线虫传人中国的风险日益剧增[a-s3。面对这种重院葛建军先生惠赠，RSSZ种群为深圳动植物检疫 大危险性外来线虫入侵的严重形势，非常有必要对 局李一农先生惠赠，RSLZ种群为华南农业大学廖 其进行深入研究，明确系统发育关系、相近种分类关 金玲教授惠赠，其它种群为笔者所在实验室人员采 系进而建立一种快速和准确的检测方法。 集。 由于rRNA基因在生物体内含量较大且在进1．2线虫DNA模板制备 化过程中较为保守，因而它是探讨生物高级分类群 线虫DNA提取参照彭德良[12]的方法进行，并 dd 系统演化的难得工具之一，近年来在分子系统进化 略加改动。挑取10头线虫放入装有7肛LH20 研究中得到了广泛的应用【9]。28S rDNA是生物体的Eppendorf管中，在一20℃的冰箱中冷冻过夜， 基因组中最保守的区段之一，而28SrDNA-D2／D3 取出后用75％酒精消毒的玻璃棒研磨至冰融化，加 区常被用来进行不同物种之间的同源性比较和系统 入10弘L的WLB(wormlysisbuffer)，3肛L蛋白酶 收稿日期：2008-03—27；修回日期：2008-04