艾维茵商品肉用鸡白细胞介素22基因的克隆和其二级结构分析.pdfVIP

中国兽医科技 　　第33 卷 　　第 1 期 　　2003 年 19 艾维茵商品肉用鸡白细胞介素2 基因的克隆 及其二级结构分析 陈吉刚 , 周继勇 , 王金勇 , 程丽琴 , 陈庆新 , 叶菊秀 , 郑肖娟 , 商绍彬 (浙江大学 动物预防医学研究所 , 浙江 杭州 　310029) 　　摘要 : 根据 Sundick 等发表的鸡白细胞介素2 ( IL2) 基因序列设计一对特异性引物 ,从伴刀豆 球蛋白 A (ConA) 体外激活的脾淋巴细胞中提取 mRNA ,通过 RTPCR 方法获得艾维茵商品肉用 鸡 IL2 cDNA 基因。将其连接到测序载体 p GEMT Easy Vector ,测序后用 Pcgene 和 DNAstar 软 件分析。结果显示 ,艾维茵商品肉用鸡 IL2 基因长 734 bp , 编码一由 143 个氨基酸组成的前体蛋 ( ) 白,与来自 GenBank 的另外 3 个品系 Kestrel leghorn , Obese 和 SC 鸡 IL2 比较,其核苷酸和氨基 酸序列同源性为98. 9 %～100 %和 97. 2 %～100 % 。二级结构预测表明 ,艾维茵商品肉用鸡 IL2 N 端存在一条由 22 个氨基酸组成的前导肽及 4 个半胱氨酸形成的链内二硫键 ,并存在类似人 IL2 的4 个 α螺旋 ,这些结构很可能在维持 IL2 生物学活性中发挥重要作用。基因系统进化树分析表 明 , 艾维茵商品肉用鸡与 SC 鸡 IL2 的亲缘关系较近 ,与火鸡、Kestrel leghorn 和 Obese 鸡 IL2 的 亲缘关系较远。 关键词 : 鸡白细胞介素2 ; 克隆 ; 二级结构 ; 基因系统进化树 中图分类号: S 852. 4 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : (2003) 　　白细胞介素2 ( IL2) 主要是由激活的 T 淋巴细 中获得成功表达。本研究旨在通过克隆和分析不同 胞产生的一类重要的细胞因子 ,在机体的免疫调节 品种或品系鸡 IL2 基因的遗传稳定性 , 为开发鸡 中具有重要作用。自 Taniguchi 等[1 ] 首次克隆成功 IL2 蛋白作为新型疫苗免疫佐剂和自然抗病生物 人 IL2 基因以来 ,先后有 30 多种哺乳动物的 IL2 活性物质奠定基础。 基因被克隆成功[2 ] 。与人和哺乳动物比较 ,低等动 1 　材料 物的细胞因子研究开发相对滞后。在禽的细胞因子 研究方面 ,直到 1997 年 ,Sundick 等[3 ] 用构建 cDNA 1 . 1 　试验用鸡 文库的方法 ,将鸡 IL2 基因克隆成功。其后 , Kaiser 1 日龄艾维茵商品肉用鸡, 由余姚市神农畜禽 等[4 ]用 RACE 技术获得了鸡 IL2 基因的全序列 ,证 有限公司提供。 明该基因的启动子、外显子、内含子等调控元件与人 1 . 2 　新城疫疫苗 和鼠的 IL2 基因在结构上有相似之处 , 发现了鸡 新城疫 LaSota 毒株和 Mukteswar 毒株活疫苗 , IL2 的 Taq 酶多态现象 ,并将该基因定位于第 4 号 由杭州荐量兽用生物制品有限公司提供。 染色体。Kolodsick 等[5 ] 通过突变分析首次证明鸡 1 . 3 　菌株及质粒 ( ) β IL2 成熟蛋白的第 17 位氨基酸 Tyr 为其受体 ( ) α 大肠埃希氏菌 Escherichia coli DH5 由本实 链结合位点 ,