脑络欣通对气虚血瘀证脑缺血再灌注损伤大鼠一氧化氮与神经细胞凋亡的影响.pdfVIP

中国中医药科技 2007 年 7 月第 14 卷第 4 期 July. 2007. Vol. 14 No. 4 2·47 · 脑络欣通对气虚血瘀证脑缺血再灌注损伤大鼠 一氧化氮和神经细胞凋亡的影响 李 　净 　李小亮 　胡建鹏 　王 　键 (安徽中医学院中医临床学院 ·合肥 230038) 摘 　要 　目的:研究脑络欣通对气虚血瘀证脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡率 、脑组织一氧化氮 ( ) ( ) ( ) NO 含量 、内皮型一氧化氮合酶 eNOS 及诱导型一氧化氮合酶 iNOS 蛋白表达的影响 。方法 :采用饥 饿 、劳累、高脂饮食等多因素复合制作大鼠气虚血瘀模型 ,然后用线栓法阻断大鼠大脑中动脉 2 小时 ,再 灌注 1 天 、3 天后 ,观察脑组织神经细胞凋亡率 、NO 含量 ,iNOS 、eNOS 蛋白表达的变化 。结果 :与模型组比 较 ,脑络欣通组神经细胞凋亡率显著降低 ,脑组织中NO 含量显著降低 ,脑缺血半暗带的 eNOS 蛋白表达 显著增加 ,iNOS 蛋白表达显著减少 。结论 :脑络欣通具有显著降低 NO 含量和抗神经细胞凋亡的作用 ,其 机制可能和促进 eNOS 蛋白表达 ,抑制 iNOS 蛋白表达有关 。 主题词 　脑缺血再灌注损伤/ 中医药疗法 　@脑络欣通/ 治疗应用 　细胞凋亡 　大鼠 　　有研究表明 ,脑梗塞患者气虚血瘀证 占73 % 以上 ,气虚 1. 4 　气虚血瘀证模型制作[6 ] 　采用饥饿 、疲劳加高脂饮食 血瘀是重要的病因病机[1 ] , 因此 ,益气活血为其主要治法 。 方法[6 ] 。 脑络欣通是临床治疗缺血性脑血管病有效的中药复方 ,主要 1. 5 　局灶性脑缺血再灌注模型制作 　参照 longa 法[7 ] 改 良 由黄芪 、三七 、川芎 、蜈蚣等组成 ,具有益气活血通络的功效 。 制作大脑中动脉阻断再灌注模型 。 近几年来 ,我们对脑络欣通改善脑缺血再灌注损伤进行了大 1. 6 　给药 　脑络欣通组在气虚血瘀证模型制成后 ,制作大 量的研究[2～5 ] 。本研究采用大鼠气虚血瘀证局灶性脑缺血 脑中动脉阻断模型前半小时给予第 1 次灌胃, 以后每天灌胃 再灌注模型 ,观察脑络欣通对神经细胞凋亡率 、脑组织中NO ( ) 2 次 ,剂量按 854g/ kg 给药 相当于成人等效剂量的 7 倍 。 含量 、eNOS 、iNOS 蛋白表达的影响 ,探讨 NO 和神经细胞凋亡 假手术组 、模型组按同样方法予以等量生理盐水灌胃。 的关系及其抗神经细胞凋亡的途径 ,揭示该方抗脑缺血再灌 1. 7 　指标检测 注损伤的机制 。 1. 7. 1 　凋亡率的检测 　根据大 鼠脑缺血半暗带的定位方 1 　材料与方法 法[8 ] ,将大脑中动脉阻塞的同侧额顶叶皮质取新鲜的脑组织 1. 1 　动物和分组 　健康雄性 SD 大 鼠 96 只 , 体重 300 ～ 100mg 置于冰盘上 , 制做单细胞悬液 , 用 PI 进行细胞核 内 320g , 由北京实验动物中心提供 。实验前适应性饲养 3 天 。 DNA 单染色 。用 Mcycle 软件程序分析 DNA 含量 ,绘制细胞 随机分为假手术组 、模型组 、脑络欣通组 ,每组 32 只 ,不同时 数和凋亡细胞分布图。 点各 16 只 ,其中 10