纤维素酶固定化的研究.pdfVIP

第 33 卷 　第 2 期 西 南 师 范 大 学 学 报 ( 自然科学版) 2008 年 4 月 Vol 33 　No 2 　　Journal of Southwest China Normal Univer sity (Natural Science Edition) Ap r 2008 ( ) 文章编号 : 1000547 1 2008 纤维素酶固定化研究 伍 红 贤 西南民族大学 生命科学与技术学院　6 1004 1 摘要 : 利用固态发酵法从瑞氏木霉 QM94 14 发酵液中提取纤维素粗酶液 , 然后将其固定在壳聚糖上 , 测定粗酶液 的酶活力 , 固定化酶与粗酶的最适p H , 最适温度和 K m 值. 结果表明 , 粗酶液的蛋白质含量为 3333 ug/ mL , 酶 活力为 120 IU/ mL . 固定化酶的最适温度为 60 ℃而粗酶液为 50 ℃, 粗酶液的最适 p H = 5 , 固定化酶的最适 p H = 4 , 固定化酶的 K m 值 3592 0 1 ×10 - 2 , 粗酶液的 K m 值为 4076 04 ×10 - 2 , 表明固定化酶的很多性质均优于游 离酶液. 关 　键 　词 : 壳聚糖 ; 纤维素酶 ; 固定化 中图分类号 : Q8142 文献标识码 : A 纤维素是植物光合作用的主要多糖类产物 , 是地球上最为丰富的可再生资源. 据报道 , 全球每年通过 光合作用可以获得新的纤维素约 40 ×1010 t , 约占地球生物资源总量的40 % , 相当于每人每天 184 kg , 其 蕴含的能量相当于当今全球总能耗的十倍以上[ 1 ] . 目前 , 利用纤维素酶水解纤维素是一种高效且无污染的 理想途径 , 它可以使大量纤维素资源和城市纤维素废料转变成人类所需的物质. 利用纤维素酶水解纤维素 获得能量 , 对于提高人民生活水平 , 缓解能源危机 , 食物短缺 , 环境污染等日益严重的社会问题 , 具有非常 重要的意义[2 ] . 固定化酶是二十世纪发展起来的一项新技术 , 19 16 年 N el son 和 Griffin 最先发现了酶的固定化现象 后 , 科学家们就开始了固定化酶的研究工作 , 1969 年 日本一家制药公司第一次将固定化的酰化氨基水解酶 用来从混合氨基酸中生产 L - 氨基酸 , 开辟了固定化酶工业化应用的新纪元. 固定化酶与游离酶相比, 具 有不可比拟的优点 , 主要表现在 : 首先 , 酶与产物易于分开 , 因而可以回收再利用 ; 其次 , 在一定程度上可 以改善酶的操作性能和稳定性 ; 第三 , 可以多次反复使用和连续操作 , 降低生产成本 ; 第四 , 酶不混入产 物 , 可以精简分离工序等[34 ] . 固定化酶的制备方法分为载体结合法 、包埋法 、交联法 3 种[ 5 ] . 随着固定化 酶技术的发展 , 越来越多的研究者致力于对纤维素酶固定化的研究 , 但是应用交联法固定化纤维素酶的报 道很少. 本文采用壳聚糖交联法固定化纤维素酶 , 研究戊二醛浓度和给酶量对固定化酶活性的影响 , 以及 固定化酶的最适温度 、p H 值 、K m . 结果表明 , 交联法得到的固定化纤维素酶与游离酶相比具有很多优点 , 对运用于工业生产具有重要意义. 1 　材料与方法 1 . 1 　材 　料 瑞氏木霉 QM94 14 ( T Ree sei QM94 14) 由中国科学院微生物研究所友情赠送. 麦芽斜面培养基 : 麦芽 提取物 2 g 、