MDRI基因沉默增强三尖杉酯碱诱导的HT9细胞凋亡.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(7)：1235—1240 · 1235 · [文章编号] 1000—4718(2012)07—1235—06 MDRI基 因沉默增强三尖杉酯碱诱导的 HT9细胞凋亡水 张伟伟，邵淑丽△， 张珍珠，付 博 (齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) [摘 要] 目的：探讨靶向P一糖蛋白(又称多药耐药蛋白1，MDR1)基因的shRNA对三尖杉酯碱诱导人耐 三尖杉酯碱的前髓细胞 白血病HT9细胞凋亡的影响。方法：构建MDR1基因特异的shRNA表达载体pS／e／ncer3．1 一 H1neo—MDR1，稳定电转染 H39细胞 ，实时荧光定量 PCR分析 MDR1mRNA的表达，Westernblotting检测细胞 MDR1蛋白表达，MTr法检测细胞活力 ，经三尖杉酯碱处理后琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA片段化，激光共 聚焦观察细胞形态变化，流式细胞术检测细胞周期变化。结果：成功构建了shRNA表达载体 pSilencer3．1一H1 nco—MDR1，稳定转染后，HT9细胞MDR1mRNA和蛋白表达均显著降低 ，H3x)细胞三尖杉酯碱的Ic50由(1．184± 0．130)mg／L降至(0．711．4-0．010)ms／L。与HT9细胞相比，经三尖杉酯碱处理后稳定转染细胞 Hlg／sh一3．1—1 的DNAladder更明显，激光共聚焦显微镜下可见形态不规则的碎片状或梅花状等典型的细胞凋亡形态 ；细胞的s 期细胞增多，并出现明显的凋亡峰。结论：shRNA表达载体 pSilencer3．1一H1neo—MDR1能够稳定、持久地抑制 MDR1基因，并有效增强三尖杉酯碱诱导的HT9细胞凋亡。 [关键词] 短发夹RNA；多药耐药；P一糖蛋白；HT9细胞；三尖杉酯碱 [中图分类号] R733．7 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．07．016 MDR1genesilencingenhancesharringtonine-·-inducedapoptosisofHT9 cells ZHANGWei—wei。SHA0 Shu—li。ZHANG Zhen—zhu。FU Bo (CollegeofLifeSciences，AgricultureandForestry，Q~iharUniversity，Qiqihar161006，China．E—mail：shsh132@163． corn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectsofP—glycopmtein(muhidrugresistanceprotein1，MDR1)shR_ NA on harringtonine—induced apoptosisofhuman harringtoninc—resistantactucpremyelocytic leukemiaHT9 ceHs． METHODS：MDR1shRNA expressionplasmidpSilencer3．1一H1neo—MDR1wasconstructednadintroducedintoHT9 cens(HT9／sh一3．1—1ceHs)．ThemRNAofMDR1wasdetectedbyreal—timefluorescentqunatitativePCR．Thepro- teinlevelofMDR1was assayedbyWesternblotting．Th eviabilityofHT9cellswas determinedbyMtiTmehtod．Afterhte cellswere treatde withharringtonine，hteDNAfragmentationofthecellswere observedbygelelectrophoresi