透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞Cyclin D1 mRNA表达的影响.pdfVIP

中医正骨2012年7月第24卷第7期 (总483) ·3· · 基础研究 · 透骨消痛胶囊含药血清 对软骨细胞 CyclinD1mRNA表达的影响 叶蕻芝 ，李西海 ，陈加守 ，郑春松 ，杨建萍 ，翁霞萍 ，曾宗鹏 ，郑志 ，刘献祥 (1．福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350108；2．福建中医药大学 药学院，福建 福州 350108；3．福建省中西医结合老年性疾病重点实验室， 福建 福州 350108) 摘 要 目的：观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞 CyclinD1mRNA表达的影响，探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能 作用机制。方法：采用抽签法将 16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组4只。低 剂量组按5mL·kgI1体质量 以5mg·mL 透骨消痛胶囊溶液灌 胃，中剂量组按5mL·kg 体质量 以10mg·mL 透骨消痛胶囊 溶液灌胃，高剂量组按5mL·kg 体质量以20mg-mL。。透骨消痛胶囊溶液灌胃，空白组按5mL·kg。体质量以生理盐水灌胃。 每天灌胃2次，连续7d，最后 1d连续2次灌胃，中间间隔2h。末次灌胃后3h提取各组实验兔含药血清低温保存备用。将6只 4周龄雄性新西兰兔处死，取其膝关节软骨，置入盛有 Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化，建立软骨细胞体外培养体系，并采用甲苯 胺蓝染色法鉴定细胞功能。将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，并分别加入含空白血 清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72h后，采用MTT法检测软骨细胞的增殖情 况，采用RT—PCR法检测CyclinD1mRNA的表达，并在透射电子显微镜下观察细胞形态。结果：Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软 骨细胞的体外培养体系，甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒。干预72h后，各组软骨细胞光密度值 比较，差异有统 计学意义(F=6．209，P=0．004)；中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组 (P=0．005，P：0．002)；中剂量组、高剂量组 软骨细胞光密度值高于低剂量组(P=0．034，P=0．Ol1)。各组软骨细胞CyclinD1mRNA表达量比较 ，差异有统计学意义(F= 8．262，P=0．001)；中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1mRNA表达量高于空白组 (P=0．002，P=0．001)；中剂量组、高剂量组 软骨细胞CyclinD1mRNA表达量高于低剂量组(P=0．012，P：0．004)；中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞。结论： 透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1mRNA的表达，从而促进软骨细胞增殖，这可能是透骨消 痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理，而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一 步的深入研究，以便为临床应用提供理论依据。 关键词 骨关节炎 透骨消痛胶囊 细胞周期蛋 白D1 软骨细胞 含药血清 StudyontheeffectofToUGU XIAoTONG capsulemedicatedserum ontheexpressionofCyclinD1mRNA in Chondrocytes YEHong—zhi ，Llxt—hai，CHEN Jia-shou，ZHENC Chun-song，YANG Jian-ping，WONGXia— ping，zENGZong-peng，ZHENGz ，LIUXian-xiang．AcademyofIntegratedTraditionalChineseMedicinewithWest— ernMedicineofFufianUniversityofTraditionalChineseMedicine，Fuzhou350108，Fujian，China ABSTRACT Objective：ToobservetheeffectofTOUGUXIAOTONGcapsulemedicatedserumontheexpressionofCyclinD1mRNAin chondrocytes，andexplorethepossiblemechanis