应用PCR_DGGE技术分析泡菜中乳酸菌多样性.pdfVIP

分析与检测 应用 PCR - D GGE 技术分析泡菜中乳酸菌的多样性 付琳琳 　曹郁生 　李海星 　陈　燕 (南昌大学中德联合研究院 食品科学教育部重点实验室 ,南昌, 330047) 摘 　要 　从泡菜液中抽提总DNA ,扩增 16 S rDNA 的V7 - V8 区 ,变性梯度凝胶电泳分离 PCR 片段 ,发现不同样 品间的菌种差异显著 。对片段直接测序和克隆测序 ,进行 Blast 分析 ,绘制进化树 。结果表明 ,D GGE 和克隆技 术相结合是研究泡菜中乳酸菌多样性的可行方法 。 关键词 　泡菜 ,多样性 ,PCR - D GGE ,乳酸菌 [ 1 ] 　　自从 Muyzer 首次将 PCR - D GGE 技术用于研 液洗涤菌体 3 次 ,加入 145 μ μ L 裂解缓冲液 ,40 L 50 究微生物多样性以来 ,近年来 D GGE 己被广泛应用 mg/ mL 的溶菌酶 , 15 U 的变溶菌素 ,37 ℃保温 3 h , 于各种环境微生态的研究 ,如高温热泉 、湖泊 、江河 、 加入 400 μ μ g/ mL 的蛋白 L C TAB 缓冲液 ,20 L 20 m 海洋 、根际、土壤 、沙丘等 。在国外 , PCR - D GGE 广 ( ) ( ) ( ) 酶 K ,50 ℃保温 2 h 。V 酚 : V CHCl3 ∶异戊醇 = 泛用于研究食品微生态 ,鉴定微生物 ,评价食品质量 , 25 ∶24 ∶1 抽提 2 次 ,CHCl3 ∶异戊醇抽提 1 次 ,无水乙 如益生菌制品[2 ] 、酸面团[3 ] 、干酪[4 ] 等 。国内尚未见 μ 醇沉淀 DNA , 离心后用 TE 溶解 DNA , 加入 2 L 到将 PCR - D GGE 用于食品微生态研究的报道 。本 10mg/ mL 的 RnaseA ,37 ℃保温 3 h 。 文首次利用 D GGE 技术对家庭泡菜中乳酸菌的多样 13 　PCR 扩增 性进行了初步研究 。 PCR 体系 :无菌双蒸水 295 μ L , 10 ×PCR 缓冲 μ μ μ 液 5 L ,2 5 mmol/ L dN TP 3 L ,5 mol/ L PCR 引物 1 　材料与方法