果蝇抗菌肽的合成及在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

H eilongj iang An im al Science 　 94 　　　 and V eterinary M edicine　　　№ 2 2008 果蝇抗菌肽的合成及在毕赤酵母中的表达 刘 　静 ,刘聚祥 ( ) 河北农业大学 动物科技学院 ,河北 保定 07 1000 中图分类号 : S852 74 + 3 文献标识码 : B 文章编号 : 1004 7034 (2008) 02 - 0094 - 03 ( ) 　　抗菌肽 A n tibacterial p ep tide s , AB P 是一类具 RN aseA、EcoR Ⅰ、SalⅠ、DNA M arker DL 2 000购自宝生物 ( ) 有广谱抗菌活性的小分子短肽 ,研究较多的是来源于 工程 大连 有限公司;超低分子质量蛋白M arker购自 果 蝇 ( D rosop h ila m elanog as ter) 的 抗 菌 肽 , 其 中 上海耕奔生物技术有限公司;M arkerⅢ、凝胶回收试剂 Cecrop in s是抗菌谱较广 、活性较强的一种 。来 自不 盒、DNA 纯化试剂盒购自北京天为时代公司。 同种属昆虫的 Cecrop in s 的共同特点是分子质量小 、 1. 4　方法 水溶性和热稳定性好 ,具有两亲 α- 螺旋 ,属于阳离 1. 4. 1　引物 　在果蝇 Cecrop in A 原始氨基酸序列基 子短肽 ,可以作用于细菌的细胞膜 ,改变其通透性 ,从 础上 ,利用毕赤酵母菌偏好的密码子 ,推出其基因的 而发挥杀菌作用 。毕赤酵母是一种可以以甲醇为唯 序列 ,并根据需要对其中部分密码子进行调整 。在此 一碳源的非常规酵母菌 ,具有强有力的 AOX 启动子 , 基础上设计 2 条具有互补 3 ′末端的寡核苷酸长链 可将外源基因整合到宿主染色体上 ,继代十分稳定 , P1 、P2 ,用于合成 目的基因片段 DCA 。为了方便后 可以高密度发酵 ,在发酵过程中自身分泌的蛋白少 , 续反应 ,在 5 端′分别添加了 EcoR Ⅰ的酶切位点、启 外源蛋白表达量高 ,是一种高效蛋白表达体系 。并且 动子 、终止子 。P3 、P4 分别为 AOX 1基因的 3 和′ 5 ′ 在分泌表达抗菌肽时 , 自身不受其杀菌活性影响 ,还 引物 , P5 为 目的片段的上游引物 , P3、P4、P5 用于验 ( ) 能保证抗菌肽分子的正确结构和适度的糖基化 ,从而 证重组子 。所用引物由宝生物工程 大连 有限公司 保证其天然活性 。试验根据抗菌肽的抗菌机理和分 合成 。果蝇 Cecrop in A 原始氨基酸序列 : GWL KK I G 子特点 ,在 已知果蝇 Cecr