广西巴马小型猪U6和7SK小RNA启动子克隆与功能验证.pdfVIP

第十一届中南地区实验动物科技交流会论文集 广西巴马小型猪 U6 和 7SK 小 RNA 启动子的克隆及功能验证 陈时锦，范 晶，蒋钦杨，兰干球，郭晓萍，郭亚芬* （广西大学动物科学技术学院，南宁 530005 ） 【摘要】目的 探讨巴马小型猪 U6 和 7sk 的沉默效应，为生产GGTA1 基因沉默的广西 巴马小型猪奠定基础。方法 本研究克隆并分析了巴马小型猪 siRNA 启动子 U6 和 7SK，并 利用 PMD18-shEGFP 载体对 PEGFP-N1 在猪肾细胞中的表达进行了 RNAi 实验。该研究以 人U6 启动子为阳性对照、无启动子的PMD18-shEGFP 载体为阴性对照、单独转染PEGFP-N1 为空白对照，验证这两种启动子在猪细胞中的功能。结果 试验表明：广西巴马小型猪 RNA 聚合酶 III 型 siRNA 启动子 U6 和 7SK 的序列全长分别为 553bp 和 437bp 。成功构建了 PMD18-pU6-shEGFP 和 PMD18-p7SK-shEGFP 干扰载体，转染猪源 PK-15 细胞，证明 U6 以 及 7sk 两个启动子具有较高的 siRNA 表达活性。结论 广西巴马小型猪 U6 和 7sk 具有较高 的 siRNA 表达活性，可以用于 α-1,3 半乳糖转移酶等猪源基因的沉默实验。 【关键词】广西巴马小型猪；启动子；功能验证 【中图分类号】S8 【文献标识码】A Cloning and functional verification of U6 and 7SK promoter of small RNA from Bama minipig in Guangxi CHEN Shi-jin，FAN Jin ，GUO Xiao-ping，LAN Gan-qiu ，JIANG Qin-yang ，GUO Ya-fen （College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530005, China ） 【Abstract 】 Objective To investigate the silencing effect of U6 and 7sk of bama-mini pig forthe purpose of producing GGTA1 gene silencing bama-mini pig. Methods we cloned and analyzed the function of siRNA promoter U6 and 7SK of bama-mini pig, ligating them into PMD18-shEGFP then transfected into PK-15 cells to RNAi PEGFP-N1 expression. We used human U6 promoter as positive control, no promoter PMD18-shEGFP as negative control, single transfection of PEGFP-N1 as blank, to certify the function of two promoters in pig cells. Results The results show that: RNA Pol III promoter U6 and 7SK for siRNA of bama-mini pig contained 553bp and 437bp, we successfully constructed two interference vectors (pMD18-pU6-shEGFP and pMD18-p7SK-shEGFP)and proved that pU6 and p7sk hold a higher expressive activity by transfecting the two vectors into PK15 c