益气养阴祛风药干预人外周血巨噬细胞SR-BI表达研究.pdfVIP

益气养阴祛风药干预人外周血巨噬细胞SR-BI表达的研究 Effects of Herbs of Tonifying Qi and Yin combined with Expelling Feng on SR-BI of Macrophage 上海中医药大学附属龙华医院心内科 何燕，汤诺，刘杰，林钟香 基金项目：国家自然科学基金（NO，上海市科委项目(NO:11ZR1437200) 摘要 目的 基于脂质代谢中的高密度脂蛋白受体研究冠心病的病理基础，拟观察益气养 阴祛风中药对巨噬细胞清道夫受体（SR-BI ）表达的影响，探求其调节脂代谢的作 用靶点，以阐明此类药物抗动脉粥样硬化（AS），防治冠心病的机理。 方法 采用SD雄性大鼠42只，制作含药血清，实验大鼠分为4组：空白组，舒心饮组 （益气养阴复方）、祛风药组、舒心饮加祛风药组；分离培养获得健康人外周血单核 细胞（PBMC）；用含药血清干预外周巨噬细胞。最后，运用流式细胞术检测含药血清 对于巨噬细胞SR-BI表达的影响。 结果 流式细胞仪检测显示：舒心饮加祛风药组SR-BI的表达高于空白血清组、祛风 药组（P0.05）。舒心饮加祛风药组比舒心饮组SR-BI的表达有升高趋势，但统计无 差异（P0.05）。提示舒心饮加祛风药可以提高巨噬细胞SR-BI的表达，且优于单用 祛风药。 结论 经比较益气养阴，祛风，益气养阴祛风药对人外周巨噬细胞SR-BI的影响，证 实舒心饮加祛风药组提高巨噬细胞SR-BI表达的作用最明显。SR-BI属高密度脂蛋白 受体，可以介导脂质选择性吸收，胆固醇的逆向转运(RCT)， 清除血管壁细胞及血 循环中多余的胆固醇等，有利于抗动脉硬化； SR-BI在AS病变部位表达增加可能是 机体的一种保护性机制，这也是益气养阴祛风中药调节脂代谢，延缓AS的发生发展， 防治冠心病的机制之一。 冠心病是临床最常见的心血管疾病，严重危害人类健康。动脉粥样硬化 (artherosclerosis,AS)是冠心病的病理基础。国内外研究发现，AS与脂质代谢关系密切， 高密度脂蛋白-胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)与AS 的发生发展呈 负相关。在抗AS 中起到积极作用。 我们既往运用益气养阴方舒心饮加祛风药治疗冠心病，已有一定的临床及实验 研究基础。本文拟在前期研究基础上，观察益气养阴祛风药干预人外周血巨噬细胞 清道夫受体-BI （SR-BI ）表达的情况，探讨其对脂质代谢的调节作用，寻求其抗动 脉硬化，防治冠心病的作用机制和靶点。 1 材料与方法 SD 雄性大鼠，42只，8周龄，清洁级，体重280 ±10g。 适应性饲养后，根据体 重随机分组编号分成4组。空白组10只，舒心饮（益气养阴方）组10只，祛风药组11 只，舒心饮加祛风药组11只。 1.1实验动物给药： 舒心饮组：黄芪、党参、麦冬、地黄、杞子等8味；祛风药组：羌活、防风；舒 心饮加祛风药组：上述两组药物相加；这些药物均由上海中医药大学附属龙华医院 中药制剂室提供。生药浓度等效于成人（70kg）剂量的12倍。舒心饮组生药浓度为： 5.16g/ml，祛风药组生药浓度为：0.8g/ml，舒心饮加祛风药组生药浓度为：5.96g/ml。 空白组：予以等量饮用水作为对照。 1.2 主要试剂 （1）淋巴细胞分离液(Ficoll,1.077g/ml)：上海华精生物高科技有限公司； （2）1640双抗培养液(RMPI 1640培养基)：美Sigma Corporation；（3）Fetal Bovine Serum(胎牛血清)：Invitrogen Corporation；（4）Rabbit Polyclonal antibody to SR-BI：Novus Biologicals公司；（5）荧光标记抗体：CELL LAB Goat Anti-Rabbit IgG(γ heavy chain specific)：BEKMAN COULTER公司；（6）0.25%胰酶溶液： 吉诺生物医药技术有限公司 （7）PBS （磷酸盐缓冲液）：在1000ml蒸馏水中溶解8g NaCL、0.2g KCL、0.2g KH PO 、2.896g Na HPO ²12H O(无水1.15g)，用盐酸（HCL） 2 4 2 4 2 调节溶液的pH至7.4，分装在500ml玻