中药芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾小管上皮细胞转分化影响.pdfVIP

首都医科大学中医药研究生论坛(2011) 中药芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK—Ay小鼠 肾小管上皮细胞转分化的影响 北京中医药大学东方医院 李敏州 【摘要】目的：探讨中药芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK—AytJ、鼠肾小管上皮细胞转分化 的影响。方法：采用自发性2型糖尿病KK-Ayt]、鼠肾间质纤维化模型。将KK—Ay／J、鼠随机分为 模型组、芪卫颗粒组、缬沙坦组，将C57BL／6Jd、鼠作为正常对照组，每组15只。芪卫颗粒组 予芪卫颗粒按生药209·kg一·d1灌胃，缬沙坦组予缬沙坦lOmg·kg一·d-i灌胃，模型组与正 常组予等体积蒸馏水灌胃。连续处理16周，检测血糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白／尿肌 酐及肾功能指标的变化。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法及荧 肌肌动蛋白(a—SMA)的表达。结果：①与正常对照组比较，各组糖尿病KK-AytJ、鼠血糖、 糖化血红蛋白、ACR及CCr指标均较正常组明显升高(PO．Ol或0．05)；病理学观察显示模型 组肾小球肥大，基底膜增厚，细胞外基质增多及肾小管上皮细胞大量萎缩、空泡变性，间质 内炎性细胞浸润，间质纤维化表现明显。经芪卫颗粒、缬沙坦处理后，上述改变较模型组明 显减轻(PO．Ol或0．05)，但两治疗组之间各指标差异无统计学意义(PO．05)。②免疫组化 显示：与正常组相比，模型组肾小管上皮细胞中E-cadherin表达减弱(PO．05)，TG卜B。 及a—SMA表达增强(P0．01)。经芪卫颗粒、缬沙坦处理后，上述改变较模型组明显减轻 (PO．Ol或0．05)，但两治疗组之间各指标差异无统计学意义(P0．05)。③荧光定量检测 E—cadherin、TGF—B。及a—SMA表达与免疫组化结果一致。结论：芪卫颗粒可能通过增强 质纤维化的进展。 【关键词】糖尿病肾病：芪卫颗粒；肾间质纤维化；肾小管上皮细胞转分化 糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病患者临床常见而难治的微血管并 发症之一，是导致患者致死的主要原因之一。DN已成为终末期肾病的首位病冈(约占35％) …。由于该病的发病机制尚未完全阐明，至今尚无理想的防治药物。因此探讨DN的发病机 制、研究有效的防治药物，已成为该研究领域的热点课题。近年研究发现，肾间质纤维化 (Renalinterstitial fibrosis，RIF)是糖尿病肾病走向肾功能衰竭的病理过程，它和肾 功能的关系较。肾小球硬化与肾功能的关系更为密切恤’3。。肾小管上皮细胞转分化 transition，EMT)被认为肾间质纤维化发生的重要机制H’， (Epithelial—to—mesenchymal 故对肾小管上皮细胞转分化进行干预治疗可能成为防治DN的有效措施。本研究拟通过建立 自发性2型糖尿病KK—Ay小鼠肾间质纤维化模型，采用中药芪卫颗粒治疗，并与缬沙坦进行 对照，观察中药芪卫颗粒对糖尿病小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响，为临床防治肾间质纤 维化提供新途径。 材料与方法 1．材料 医学科学院动物中心(动物合格证号：SCXK(京)2009-0004)。饲养于北京中医药人学实验动 物中心，温度控制在22℃左右，湿度60％，12h明暗交替照明。 1．2药物与试剂芪卫颗粒由首都医科人学中医药学院制备，缬沙坦胶囊由北京诺华制药有 第～篇 实验研究 8 cDNA 第一链合成试剂盒(CW0744)及UltraSYBRMixture(withRox)(CW0956)均购自北京康 为世纪生物科技有限公司。 1．3引物序列由上海英潍捷基(上海)贸易有限公司合成。引物序列见表1 表1荧光定量PcR引物序列及引物间片段长度 1．4仪器WL9一ONETOUCHUltra稳豪血糖仪(美国强生)；GD8一DCA2000+糖化血红蛋白／ 尿微量白蛋白分析仪(德国拜耳)；7160全自动生化分析仪(日本日立)；奔腾删X多媒体微 ABI)。 2．方法