中药乌梅炒炭前后DNA指纹图谱研究.pdfVIP

度增大，或者因为盐的存在，在盐炙过程中促进了新物质的生成。这一系列化学成分的变化 ‘町能是炮制增强药效的根本原凶。本实验中仅选取了蜕皮甾酮、25R．牛膝甾酮、25S．牛膝甾 酮和serfurosteroneApq种已知成分做对照，发现其盐炙后含量的显著变化。但对十其他成 分的具体结构和变化过程，还有待于进一步的研究。 参考文献 fl】孟大利，李铣．中药牛膝化学成分和药理活性的研究进展【J】．中困药物化学杂志，2001，】l(2)： 120．124． 【2】韩紫岩，牛艳阳．牛膝的研究概况【J】．中困药qk，2007，16(15)：64—66． 【3】困家药典委员会．中华人民共和田药典【M】．北京：巾困医药科技出版社，2010：67． 【41杨柳。盐炙牛膝补肾壮骨的约效物质基础及炮制机理研究[DI。哈尔滨：黑龙江中医药大学， 2010 中药乌梅炒炭前后DNA指纹图谱的研究 许腊英。，石琪，余倩倩，潘新，刘山 (湖北中医药大学药学院，湖北，武汉430065) 摘要 目的：探讨乌梅炒炭炮制Ij{f后DNA指纹图谱特征。方法：采用随机引物扩增多态 性DNA(IUPD)技术扩增植物基凶组DNA样品。从lO个引物巾筛选出能稳定扩增的引物 获得清晰n，靠的DNA指纹图普，不I司产地的乌梅牛品DNA指纹图谱一致，均有900bp、750bp、 多出了400bp的条带。结论：RAPD技术町作为乌梅生品道地品种的签定的参考方法。 关键词 乌梅：炮制；RAPD：DNA指纹图谱 乌梅为蔷薇科植物梅尸r”门螂mume(Sieb．)Sieb．etZucc．的干燥近成熟果实，始载于《神 农木草经》，列为LlJ品。至今已有2000余年的药用历史。其味酸、涩，性温，入脾、肺、 大肠经。乌梅具自．敛肺止咳、牛津止渴、安蛔、止血等功能，也可外用十疮疡久不收U等。 乌梅制炭后则长于I卜血、I}：泻，用于久泻、久痢及便血、崩漏卜血筲i止。本文以四川达县、 湖北恩施和湖北GAP基地的乌梅为实验刘’象，基十PCR技术的DNA指纹图谱在qJ药品 质研究上的稳定性和_罩．现性。我们在H内外卣‘次采用RAPD技术对乌梅炮制前后的DNA 指纹图谱进彳j：分析，从分子水平对乌梅药材进行研究。 I实验材料 1．1仪器5415D型台式高速离心机(德l词Eppendorf公司)；Tpersonal型仝自动PCR仪 ·壮仑项ll：114家fJ然科学皋企资助项II《乌梅炭凝舡机瑚研究》1307727871 ·通i代作栉：i，l：腊英(1952～)．殳，汉旅，湖北．教授。研究方向：中药炮制舭{!c【化研究．电话 Email 63．com- xulaying@1 323 水槽(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；UV-2000犁紫外可见分光光度计(美国尤尼柯 UNICO)；美国BlO—RADGelDoc2000凝胶成像系统。 DNA Ladder(北京TIANGEN有限公司)； 1．2试剂溴化乙锭(EB，Fluka公司)；100bp Reaction DNA 10xTaq Buffer，Taq 技发展有限公司)；琼脂粉(武汉中建科技发展有限公司，闷本公司进口分装)；十二烷基 公司，其余试剂均为}卡j产分析纯。 1．3药材本实验所用的材料全部为乌梅药材，药材来源见表l。 表I实验药材 2方法与结果 2．I方法 2．1．1DNA模板的提取It,Z,3l称取200mg各药材样品加入液氮充分研磨成粉末，加入 mmol／LEDTA，500mmol／LNaCI，2．5％PVP， 3．5mL56℃缓冲液(1OOmmol／L醋酸钠，50 min， min。10000ffmin离心10 3％SDS，1％p