银杏黄酮的酶法提取工艺研究.pdfVIP

维普资讯 · 14 - 林产化工通讯 2004年第 38卷第 1期 银杏黄酮的酶法提取工艺研究 王 晖，刘佳佳 中南大学 化学化工学院制药工程系，湖南 长沙 410083 摘 要 ：研究了银杏叶中黄酮的酶法提取工艺，银杏叶原料经纤维素酶预处理后浸提 ，总黄酮得率 显著提高，对叶得率可达到 2．01％。其酶解过程的最优参数为：料液 中酶 的质量浓度为 0．125 L，酶与底物配比为 1：1200，酶解温度45oC，自然 pH值 ，酶解时间2h。 关键词 ：酶法；纤维素酶 ；银杏叶黄酮；提取工艺 中图分类号 ：$792．95 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—3433 2004 01-0014-03 黄酮类化合物是银杏叶中重要的生理活 J 。 性物质，具有降血脂 、抑制血栓形成 ，调整脑 1．2 检测 方法 及周围血管血流，清除 自由基等作用。临床 本研究以芦丁为标准对照品，采用分光 上用来预防和治疗脑动脉硬化症 、脑血管循 光度法测定银杏叶提取物中黄酮类化合物的 环不畅、脑震荡 以及高血压、冠心病、心肌梗 含量 。绘制浓度一吸光度标准 曲线 图，回归 塞等疾病 。 得标准 曲线方程 ：Y 72．99553A一0．03003 银杏叶提取物 GBE 主要是 由水、醇一水 式中，，的单位为mg／L ，r 0．99988。样品 溶剂浸提得到，此外还有超临界流体萃取、超 按 同一方法显色后 ，测定吸光度，根据标准 曲 声波、微波提取等方法 ]。作者主要研究 线计算含量。 了银杏叶中黄酮的酶法提取工艺 ，它在常规 1．3 实验方案 的醇．水浸提之前对原料进行酶预处理 ，可 整个工艺分为酶解和浸提两个部分 ，原 大大提高总黄酮得率 ，简单易行。 料经酶解后在相 同条件下浸提 ，提取物干燥 1 实验部分 后即为产品。酶解工艺的各影响因素，如酶 1．1 原料与仪器 用量 、酶解温度、溶剂 pH值 、酶解时间等被 原料 ：银杏叶为2002年9月份在中南大 逐一考察。产品质量 由总黄酮对 叶得率衡 学校园内采集 ，干燥后装袋备用。 量 ： 标准品：芦丁购 自中国药 品生物制品检 总黄酮得率 对叶 ： x100％ 定所 。 试剂 ：纤维素酶购 自上海丽珠东风生物 2 结果与讨论 有限公 司；果胶 酶为德 国 E．Merck公 司生 2．1 酶种类的影响 产。其它试剂均为分析纯。 在酶解温度 45cC，酶用量 2．5mg，原料 仪器 ：756CRT分光光度计 ，上海仪器总 自然 pH条件下 ，酶解 1h后灭 酶浸提 ，考察 作者简介：王 晖 1979一 ，女，四川西昌人 ，硕士，主要从事天然药物提取及应用的研究 。 维普资讯 林产化工通讯 2004年第 38卷第 1期 ·l5 · 纤维素酶、果胶酶及其协同作用对总黄酮得 增加量 mg 明显高于 5mg时。综合两个指 率的影响。实验结果见表 1。 标 ，最佳酶用量为 2．5mg，此 时料液 中酶的 质量浓度 为 0．125g／L，酶与底物配 比为 表 1 酶种类对浸提的影响 1：1200。 2．3 pH值 的影响 溶液 的pH值影 响着酶 的活性 ，纤维素 酶的活性 中心偏酸性条件 ，故在酶解 温度 45℃，纤维素酶用量 2．5mg，酶解 1h后灭酶 浸提，考察酸性条件下 ，pH值对浸提的影响。 实验结果如 图2所示 。在酸性条 件下 随着 pH值的增大 ，总黄酮得率显著提高 ，在碱性 从表 l可 以看 出，加入纤维素酶后总黄 条件下总黄酮得率下降并且提取物色泽发 酮得率大大提高，但加入果胶酶反而使总黄 黑。说明纤维素酶在微酸性条件下，活性较 酮得率降低。纤维素酶破坏了细胞壁，释放 好。实验 中发现原料液本身 自然 pH值 显 出胞 内物质，而果胶在果胶酶作用下的水解 微酸性 6．5～7．0 ，在 自然 的pH值条件下 产物对黄酮类物质的吸附性较强 ，使得总黄 得率最高。因此 ，实验 中可省略 pH值调节 酮得率低于无酶实验结果。加入复合酶的总 步骤。 黄酮得率都低于相同用量的纤维素酶 ，两种 酶无明显协同作用。因此 ，单一纤维素酶是 较优的选择 。 一 静 2．2 酶用量的影响 蕊 在其它工艺条件不变的情况下 ，考察单 枢 一 纤维素酶用量对总黄酮得率的影响，以确 定最佳酶与底物的配 比，实验结果如图 1。 图2 pH值对浸提 的影响 一 褥 2．4 酶解温度 的影响 蕊 枢 酶通常在4O一5O℃下活性最好 ，温度过 低酶活性降低 ，而温度过高却使酶蛋 白变性 失活，丧失催化能力。故实验 中设置 了 35、 4O、45、5O、55℃五个温度水平 ，其余条件不 图 1 酶用量对浸提 的影 响 变 ，考察酶解温度对总黄酮得率 的