椭圆偏振术在生物分子芯片研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 第34卷 第3期 曲 阜 师 范 大 学 Vo1．34 No．3 2008年 7月 Journal of Qufu Normal July2008 椭圆偏振术在生物分子芯片研究中的应用 宋致堂， 李国华， 张 霞， 孔凡美， 宋师霞 (曲阜师范大学激光研究所，273165，山东省曲阜市) 摘要：介绍了利用椭圆偏振测量仪原理测试生物芯片的检测方法．其最大优点在于测量过程不破坏被 测体系，样品需要量少，操作简单，而且灵敏度高，可反映接近原子尺寸的变化，又能原位 、实时跟踪检测表面 膜的变化情况．椭圆偏振术在生物医学领域有着广泛的应用． 关键词 ：生物芯片；光学椭偏成像技术；椭圆偏振术；应用 中图分类号 ：0436 文献标识码：A 文章编号：1001-5337(2008)03-0059-04 1 研究背景和意义 展方向是设计一种不需要任何样品标记的检测方 法．下面介绍一种新的检测方法——利用椭圆偏振 生物芯片技术近年迅速发展，其中信号检测是 测量仪进行检测． 生物芯片一个重要的相关技术．生物芯片是指在一 小块硅片玻璃或薄膜上，有序地点阵固定成千上万 2 椭偏法研究生物分子芯片 携有标记物的可寻址识别分子，识别分子与未知样 品发生反应，标记物就产生相应的变化，将其变化信 2．1 传统的椭圆偏振测量法 息检测出来，便可获得样品信息．生物芯片的检测 利用椭圆偏振测量仪测量物质的光学常数是一 就是获取标记物变化的信息的过程，是生物芯片相 种经典方法．线性偏振光入射到介质上 以后，反射 关技术的一个重要组成部分． 光的P分量和s分量的振幅反射系数分别为r。和 目前生物分子芯片 (亦称作蛋 白质芯片)主要 ， 它们都是与物质的反射特性有关的复数，因此可 有2种检测方法，一种为标记检测，另一种为非标记 以反映物质的光学特性，即通过他们计算出物质的 检测．一些荧光试剂如Cy3，Cy5、量子点等经常作 光学常数，反射光是椭圆偏振光，椭圆偏振光的特征 为探针标记蛋白质，标记后用荧光显微镜直接观测 可以用函数表示 或成像．化学发光体系中辣根过氧化物酶、碱性磷 p( )= ‘ei(Sp-8,)-tan ．e ， (1) 酸酶及化学发光试剂异鲁米诺等也常用于蛋 白质的 标记．这些方法一般灵敏度较高，主要缺点是操作 其中tan =rp／r表示2种反射偏振光的相对振幅 复杂，标记后大大改变了蛋 白质的表面特征，尤其是 变化，A=( 一8)表示2种反射偏振光的相位差， 在改变赖氨酸侧链正电荷时，可能在很大程度上导 可以由实验测得椭圆参量 和 求出物质的折射 致蛋白质的变性．另一种标记方法是同位素标记 率和厚度．图1是一种 PSMA结构的椭偏仪．它在 法．为了克服质谱技术中无法区别两个样品中同一 检偏器和样品之间加一个相位差调制器，激光器发 蛋白的缺陷，Aebersod等应用了同位素标记技术， 出的光经起偏器后变为线偏光，通过样品反射后变 这种标记技术类似于两种颜色的标记．同荧光标记 为椭圆偏振光，通过调节相位差调制器，来补偿样品 技术一样，同位素标记技术也有很多缺陷而不能很 对光线的影响，可使最后通过调制器的光成为线偏 好地用于蛋 白质芯片检测．并且这些产品体积大， 光，并由检偏器检出其偏振方向