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电分析化学进展·1999
最佳实验条件的选择 电化学标记DNA探针的制备取决于电活性物质醛基二茂铁上
的醛基与ssDNA链上引人的胺基的反应。醛基二茂铁的浓度、反应温度与时间均影响醛基二
茂铁在DNA链上的标记．通过实验我们选择FcA浓度2．5×10叫m01．L～、在20℃下反应过
夜． -
我们还讨论了待测DNA链在石墨电极上的电化学富集。当待测DNA链的浓度在5．o×
10-7r呻I．L-1时，富集电位为O．5V，富集时问为zmin。许多因素影响醛基二茂铁标记DNA探
针对互补靶序列的测定：杂交温度、杂交
缓冲溶液在温度为40℃水搭中反应1h．
醛基二茂铁标记DNA电化学探针
的电化学响应 我们髑备的醛基二茂
铁标记DNA电化学探针对靶序列小牛
胸腺DNA有良好的响应．线性范围为
1．0×10“moLL“～5．0×lo-‘moI．
L-I，图1为鲢基二茂鞔标记DNA电化
学探针在1．O×10。mil．L“～5．0x
10。mol_L-1浓度范围内的电化学响应
曲线，相关系致Rl—o．9961．靶序列小 ●l‘’‘●■●●●■，‘t‘I．．-●l川
牛胸腺DNA的．最低检测限为5×10。 ‘ 点／V(v．抽／^_c1)
Ⅲ“L ’
圈1 t基=茂铁标记DNA电化学探针的电化学响应
3-睦基=茂铁标记DNA电化学探变性小牛膏纛DNA的被庹从1至4分别为1．o、3．o、4．o、
针的选择性 将已分别富集了待铡ss—s．o×10tm01．I．一·
DNA片段(变性xDNA、变性小牛胸腺
=茂铁标记DNA电化学探针在2×SSC缓冲溶液中进行杂交反应，结果见表1．从表中可以
看出，醛基二茂饿标记DNA电化学探针具有较好的选择性，非同源DNA片段的存在对靶序
列的测定基本不构成千扰． ．
表1■基=茂铁标记DH^皂化学探针的选择性
不同来曩的DNA片段与变性小牛■■∞DNA—FcA探针杂交的电
富集时加^∞Jfthymu5
化学响应(pA)
DNA的量 ’
sperm ^ pBR322yea$t 偶Hthymus
(X107m01．L一1)
轴DNA 辩DNA ssDNARNA s8DNA
O 0．03 o．02 0．02 o-02 0．47
S．O 0．‘4 O．t5 0．45 0．45
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电分析化学进展·1999
参考文献
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Wdng、Gustavo
DNAProbethe of
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