甘油对小球藻生长及代谢产物的影响.pdfVIP

201 全国生物化工技术发展研讨会论文与成果汇编 1济南 本实验使用甘油作为生长的碳源及能源物质培养小球藻，以及监测生物量、油脂含 量、发酵液pH值、甘油浓度、还原糖含量和COD值的变化，探究甘油对小球藻生长 及代谢产物的影响。 l材料与方法 1．1藻种 由中科院水生生物研究所淡水藻种库购买的普通小球藻，Chlorella vulgaris(简称 C1，)。 1．2培养基 250 75 75 SE培养液：NaN03 mg，K2HP04·3H20mg，MgS04·7H20mg，CaCl2·2H20 25 175 25 5 mg，KH2P04mg，NaCImg，土壤提取液40mL，FeCl3·6H20mg，Fe．EDTA l mL。 mL，蒸馏水958 mL，A5液l SE+培养基是在SE培养基的基础上添加10 g／L的葡萄糖。添加甘油的SE培养基是 在SE培养基的基础上，添加不同浓度的甘油，建立甘油浓度梯度培养条件。 1．3培养条件 琶 将纯化的藻种接种至不同条件的培养基中，置于摇床中培养，转速130 rpm，温度 l g／L的甘油。 1．4分析方法 藻细胞生物量的测定采用分光光度法和细胞干重法。分光光度法：用紫外／可见分光 光度仪测定藻溶液在680n／n处的吸光度值(OD680)。细胞干重法：培养期末，取一定 r／min，10 体积在藻液，离心分离(4800 min)收集藻体，蒸馏水洗涤两次，经冷冻干燥， 称重，以g干菌体·L。发酵液表示菌体生物量。 pH值：使用pH试纸测定发酵液的pH值。 油脂测定采用磷酸．香草醛法【14J。标准曲线方程如下： y=12．149x+0．797，R2=O．9933 mL)。 式中，X为微藻的吸光值OD530，Y为油脂含量(ug／100 油脂提取采用氯仿甲醇法【15】。 还原糖含量的测定：取1mL样品，加入lmLDNS液，沸水浴5min。流水冲外壁， mL，静置15min。在540 使其快速冷却。定容至10 nin处测定其吸光度值。再根据标 准曲线得到发酵上清液的还原糖含量。标准曲线方程如下 y=0．6257x+0．0035，R2=O．9955 式中，x为吸光值ODs40，Y为还原单糖含量(g／L)。 发酵上清液COD采用重铬酸钾法测定。 59 全国生物化工技术发展研讨会论文与成果汇编 2011济南 发酵上清液甘油残余量采用比色法【161测定，标准曲线方程如下 90x一0．5667，R2=0．9990 Y=47．61 式中，x为吸光值00412，Y为甘油浓量(mg／L)。 2结果与讨论 2．1不同培养条件下小球藻生物量的变化 根据测量的680 nlTl处的吸光度值，绘制不同培养基条件下的生长曲线，如图1和 图2所示。