亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞体外成熟和凋亡及影响.pdfVIP

l第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 论文集 ●暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 畜牧学部分·遗传育种 亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞 体外成熟和凋亡的影响 乔利敏1，乔富强2．姚华3，雷莉辉1，关伟军4”，马月辉4。 (1．北京农业职业学院畜牧兽医系，北京102442；2北京农学院科技产业集团，北京102206； 3．北京农学院动物科学技术学院，北京102206；4．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193) 摘要：为了探讨亮甲酚蓝(brIiIiantbIue，BCB)对牛未成熟卵母细胞染色选择后对其体外成 cresyI 以未染色卵母细胞作为对照组；将处理组依照胞质的颜色分为蓝色组(BCB+)和无色组(BCB一) 成熟培养后检测卵子的发育能力 结果表明：(1)经BCB染色卵母细胞在成熟后，BCB+组卵母细 胞成熟率(80．83％)较对照组(60。20％)和BCB一组(51．92％)差异显著(P(005)；(2)BCB+ 胞发育潜能的升高其凋亡率逐渐降低由此可见，以亮甲酚蓝染色为基础的牛卵丘～卵母细胞复合 体的区分可以用来有效的选择更具发育活力的牛卯母细胞 关键词：牛；卵母细胞；亮甲酚蓝染色；体外成熟 在哺乳动物胚胎的体外生产过程中，卵母细胞作为胚胎 间接地筛选H{已经完成生长过程的卵母细胞，进而改善胚胎 体外生产的重要元件，其体外成熟(InVj呐MaIura“on，IvM)的体外生产效率。目前，该法已成功运用丁-多种动物”…，国 的质量直接影响胚胎的体外生产效率。目前，胚胎生物技术 内乔利敏等”研究显示，用BcB染色可以有效地筛选H1发育 研究主要从屠宰厂收集卵巢，由于被屠宰动物在年龄及生理 活力高的牛卵母细胞，并有利于体外受精胚胎的发育，但迄今 状况上差别很大，以致于获得的卵母细胞质量差别也很 未见BcB染色对细胞凋亡影响的详细报道。细胞在病理条 件F或者受到外界因素的应激刺激之后，细胞自身会发生一 大…。传统的卵母细胞挑选方法主要是依据卵丘～卵母细 00cyte 系列的变化，如细胞膜及线粒体膜的通透性增大，钙离子外 胞复合体(cumuluscomplex，cocs)的层数、胞质的颜 色以及均匀度等形态学指标。但该法并不能真实反映卵母细 流，线粒体膜电位下降等，细胞趋于凋亡‘…。本研究应用 BcB染色选择牛卵母细胞，然后对其体外成熟和凋亡的影响 胞的发育潜能，而且不同操作者之间也存在一定的主观判断 进行了研究，旨在进一步探讨BcB染色对牛未成熟卵母细胞 差异，所以，胚胎的体外生产效率仍然不高。葡萄糖—6一磷 发育潜能的选择，为进一步的胚胎工程研究和应用奠定基础。 酸脱氢酶(G6PDH)是与卵母细胞能量代谢相关的一种重要 1材料与方法 关键酶，它在生长期的卵母细胞内活性很高“。．但在已完成 1．1药品与试剂 cre- 生长的卵母细胞中活性急剧下降J。亮甲酚蓝(城】】jant sylblue，BcB)作为一种生物染料【4J，与卵母细胞中的G6PDH Bwine 牛血清(Fetal serum，FBs)购自cho公司；试剂除特 发生作用后能使胞质由蓝色变为无色，故通过BcB染色可以 殊注明外均购自sigma(usA)公司。