叶甲科部分种类线粒体COⅡ基因分子系统学研究（鞘翅目：叶甲总科）.pdfVIP

叶甲科部分种类线粒体COIl基因分子系统学研究 (鞘翅目：叶甲总科) 张高峰 mm～17．0 ml-n。体形为长 (Chrysomeloidea)。其主要特征为：成虫一般体长1．0 圆、卵圆或长方形。体色多样，有的具有较强金属光泽或具条带、花斑。本科中 的许多种类是农林、蔬菜、牧草的重要害虫，危害植物的叶、茎及根部。叶甲作 为农牧业重要的害虫一直受到生物学家们的重视。生物学工作者长期以来为了寻 求叶甲防治方法，一直进行着有关叶甲生物学的基础研究，包括系统学研究。在 分类系统上，最初是集中在形态学方面，随着科学技术的发展，各种研究也日趋 广泛和深入。上世纪末，研究者开始进行一些亚显微结构及分子方面的研究。近 年来，昆虫系统演化的热点已转入分子水平。线粒体基因组由于其特有的遗传学 特点，成为研究真核生物分子遗传学、发育生物学和分子系统进化的一种重要的 模式体系。线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ基因由于其分布的普遍性、序列和结 构的相对保守性而被广泛应用于不同分类阶元层次上的分子系统学研究。本研究 采用PCR产物直接测序法测定了叶甲科3个亚科11属15种昆虫COIl基因，并 COIl基因片段，利用负泥虫Crioceris 从NCBI下载了七种相关叶甲昆虫的540bp X进行序列比对， duodecimpunctata的COil基因序列作为外群序列。利用Clustal MEGA3．1进行序列组成统计。并以NJ、MP和贝叶斯系统发育推论法分别重建系 统发生树。得出结论如下： 换呈现T一一c偏向性；颠换的发生主要以T一一A为主，且大都发生在密码子 第三位。按叶甲科22种昆虫COlI基因540 bp序列基编码180个氨基酸，氨基酸 组成中，22种昆虫均不含半胱氨酸(Cys)，由19种氨基酸组成，其中亮氨酸(Leu)， 亮异氨酸(LIe)含量最高，反映出COII基因在氨基酸组成上由一定的偏向性。 2、叶甲线粒体COIl基因中核苷酸的替代转换与颠换值之比R为0．8；转换和 颠换与遗传距离呈线性关系；说明转换和颠换尚未达到饱和。R值表现了昆虫线粒 体DNA的典型的距离依赖性。说明两者均显示该数据组包含较强的系统发育信号。 V 3、基于COII基因序列利用MEGA3．1、PHYLIP3．0等软件， 3．6a、MrBayes inference)进行 采用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)和贝叶斯推论法(Bayesian 系统发育树的重建，各树的～致性和统计学支持较好，同一属内的种间以很高的 置信度优先聚为一枝，亚科内的不同属间基本表现为单系性，且枝间分歧小于枝 内分歧。 4、跳甲亚科较萤叶甲亚科与叶甲亚科关系更为近缘。这一结论与前人在形态 学、支序系统学、及细胞分类学的结论相矛盾。所有的系统树均显示圆肩叶甲属 与萤叶甲亚科有较近的亲缘关系，这与传统分类学结果相背离。笔者认为此属的 分类地位有待于进一步讨论。 5、4种叶甲属种类显示出了较好的单系性。杨叶甲为该类群中进化速度最快 的种类，其次为白杨叶甲，再其次为柳二十斑叶甲，进化速率最慢、最原始的种 类为柳十八斑叶甲。 6、基于蛋白质序列利用最大简约法所建系统树时，发现有些属(守瓜属、金 叶甲属)的氨基酸序列与核苷酸序列进化并不同步。 7、运用COIl基因的核苷酸序列对叶甲科昆虫进行系统研究时，各属种间的 分类关系都比较明确，得到的树的拓扑结构大都一致。因此，COII基因在对叶甲 科科下亚科以及种属阶元的分类与进化关系研究中，是一个有效的分子标记。 本研究对叶甲科15种昆虫mtDNACOII基因的部分