微卫星座位对实验动物Beagle犬的遗传分析.pdfVIP

一、大型实验动物资源开发与遗传育种 101 S研 见报道。 1材料与方法 犬(下称进口犬)和饲养繁殖的Beagle犬(下称自养犬)种群进行遗传多态性分析，以确定商品实验犬的 遗传背景，进一步提高商品用犬的质量，探讨纯质基因监控的方法与措施。本实验我们选择4个微卫星座 位进行了研究，其中选取一个多态性较好的位点作详细的遗传分析。 1．1材料与仪器 1．1．1 血样 20条为本基地自养犬，19条为进口犬，公母各半。 1．1．2试剂 割胶回收试剂盒(上海华舜生物公司)，聚丙烯酰胺凝胶：丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(19： 为国产分析纯。 1．2方法 1．2．1 基因组DNA提取 取EDTA-Na2抗凝血150p1，参照赵书平等方法提取(赵书平等，1999)。 1．2．2基因组DNA的鉴定 取溶解的DNA 测定提取的基因组DNA的紫外吸收峰。计算DNA浓度、纯度． 1．2．3基因组DNA体外PCR扩增 et et a1．，1997iEdwardal。，2002)设计，其中一对引物序列为： 4对引物参照文献(Cathryn P1：5’-CATTGArGCTGAATTTGACTTC一3’ ； PR：5’．11ACACACACTl蜘HTTGCTGGTCA一3’ 在25I．tl反应体系中加模板29l，lOmMdNTPs(0．5u1)，10xBuffer2．5pl(含1．5mM MgCl2)，前后引物各 5units／ul 0．51xl(25I．tM)， Taq 变性5分钟，后按94℃30秒，629C30秒，72’C60秒30个循环，72C延伸7分钟，然后水平凝胶电泳检查 扩增结果。 1．2．4 琼脂糖水平检测 以2％琼脂糖凝胶70V电压条件下电泳35分钟，紫外凝胶成像系统照相。 1．2．5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamidegel electrophoresis，PAGE)分析 8“l，10xTBE缓冲液1．5ml，尿素5克，无菌水10ml。以2plPCR扩增产物+5I．tl 过硫酸铵85rtl，TEMED 1．5小时。电泳结果以硝酸银染色(许绍斌等，2002)。 1．2．6 割胶回收DNA 102 20]1东莞第=届国际小型猪学术论坛暨^型实验动物生物E药研兜应用研讨会 DNA带，做铡序用。 1．27 测序 以扩增引物作测序引物对3个样品进行测序(上海博亚生物公司)。 1．28 数据分析 ddPAGE结果．计算等位基因频率，基囡纯台率，基因分化系数，多态信息含量，杂台度。 2结果与讨论 2．1基因组DNA提取与鉴定 8～I 分光光度计测定所有样品吸收峰值A。∞和A‰且计算A2一Aw。比值均在l9之间，根据260m吸光度 值计算DNA的提取效率，旅度均在70ll∥¨l以上，可见该法提取的基因组DNA满足纯度、浓度要求。 M I 2 3 4 5 6 7 8 9 lO 11 M 因组DNA．M：M{indIH分子量标志1 The Fmlporfionwsu№ofgenomicDNAofBe,agled噜5on06％A印*gele1％trophoresis (Linesl～5：genomicDNAofdomesticbeagledogs，L衄es6～llg∞…DNA 2．2 PCR扩增产物初步分析 o、15、2．0