鸭茅种质资源遗传多样性的相关序列扩增多态性分析.pdfVIP

420 草业科学 werecorrelativewith and distributionofaccessions．In narrow chardgrass karyotypegeographical addition,the were isefficienttobreedmoreexcellentor- basicofChinese cultivars genetic orchardgrass found．Overall，it andreleasethe variationaccessionsthisresearch． chardgrass genetic among by Keywor凼：Orchardgrass；Germplasm；GeneticDiversity；SRAP 相关序列扩增多态性(Sequence—relatedampli．样性分析[12-131。所以SRAP标记在牧草和草坪草 6ed 遗传育种研究中具有非常广阔的的应用前景。为 polymo叫sm，SRAP)是一种新型的基于PCR 的标记系统，由美国加州大学蔬菜作物系Li与 此，我们将其引入鸭茅的遗传多样性研究，以获得 更全面的关于鸭茅遗传变异方面的信息，为鸭茅遗 Quirostll于2001年提出，也称基于序列扩增多态性 传育种服务。 (Sequenceo地sedamplifiedpolymorphism，SBAP)H。 它最早是在芸薹属(BrassicaL．)作物中开发出来， l材料与方法 是一种新型的基于PCR的随机引物标记系统，除 了方便可靠和经济外，还具有中等产量、高共显性、 1．1供试材料 易于分离条带及易于测序等优点。 所有资源来源如表l。鸭茅植株通过温室盆 SRAP的原理是利用独特的引物设计对栽后取样。 framos，开放阅读框架)进行扩2．2鸭茅基因组DNA的提取 ORFs(openreading 增，上游引物长17bp，5’端的前lObp是一段填充实验取生长正常的鸭茅幼嫩植株的心叶采用 序列，紧接着是CCGG，它们组成核心序列及3’端CTAB法提取鸭茅DNA【3l。 3个选择碱基，对外显子进行特异扩增，因为研究 2．3鸭茅SRAP反应体系的建立及优化 表明外显子一般处于富含GC区域。下游引物长 实验以“u的反应体系为基础，对SRAP的 18bp，5’端的前10bp—11bp是一段填充序列，紧接影响因素，如M矿、dNTP、Taq酶、引物浓度、模 着是AATT，它们组成核心序列及3’端3个选择碱板DNA等进行了研究，对其逐个作以梯度(最终 基，对内含子区域、启动子区域进行特异扩增，因个 浓度或最终加入量)，再进行PCR扩增分析。在 体不同以及物种的内含子、启动子与间隔长度不等 研究每个影响因素时，严格控制其它条件，依据前 而产生多态性【I】。 期预备实验结果固定不变，确保实验的准确性和 SRAP已在农作物和园艺作物上有了较多成可比性。通过预备实验获得鸭茅SRAP分子标记 功的应用，如甜瓜‘31(CucurbitapepoL．)、笋瓜脚(C 的25¨L最优化反应体系(最终浓度)：Mg+为1．6 maxima hirsutum L．)、桃嘲 L．)、陆地棉Hl(Gossypium L．1、甘蓝型油菜嘲(Brassica (Amygdaluspersoca 物浓度为O．3斗mol／L、模板DNA量为60rig。 oleracea PCR反应在ThermoPCR